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目的：建立一种基于荧光检测的流感病毒神经氨酸酶中药抑制剂快速筛选方法。方法：方法的构建原理是供试品和一定数量的神经氨酸酶（NA）作用后，部分NA的活性会被供试品抑制，加入底物后仍具有活性的NA和荧光底物结合后在特定波长下可以产生荧光，根据测得的荧光度计算供试品对NA的抑制率，从而评估供试品对NA的体外抑制活性。首先，在黑色96孔荧光酶标板内每孔加入NA检测缓冲液70 μL和NA 10 μL，再分别加入供试品浓度1至浓度5溶液各10 μL。第二，在微孔板检测仪中37 ℃避光孵育2 min后每孔加入NA荧光底物10 μL，使每孔中溶液的总体积为100 μL，在微孔板检测仪中震荡1 min。最后，在微孔板检测仪中37 ℃孵育30 min后在激发波长为322 nm，发射波长为450 nm的条件下检测荧光度。利用新建立的方法对来源于12种中药中共计49个高纯度化学成分进行体外抗NA活性评价。利用NA蛋白受体和供试品对接后的结合能和抑制常数的理论计算值来证明实验实测结果的准确性。将新建立的方法应用于检测不同批次的板蓝根颗粒和抗病毒颗粒在体外抑制NA的活性，以此评价不同批次间的质量一致性。结果：方法学考察结果表明该方法具有较好的准确性[相对标准偏差（RSD）2.5%)]和重复性（RSD2.7%）。49个高纯度化学成分供试品筛选结果显示，有22个化学成分在体外对NA的抑制活性强于帕拉米韦[半抑制浓度(IC50)131.2 μmol·L-1]，例如夏佛塔苷、异荭草苷、诃子酸、胡薄荷酮、异夏佛塔苷的IC50分别为22.92、23.07、27.61、32.16、50.27 μmol·L-1，其余27个化学成分在体外对NA的抑制活性弱于帕拉米韦对NA的抑制活性。分子对接结果显示，大部分化合物的结合能和抑制常数理论计算结果和实验实测结果基本一致。12批板蓝根颗粒供试品对NA的抑制活性检测结果显示供试品A1～F2在测试浓度均为0.02 g·mL-1时对NA的抑制率分别是：39.00%、41.38%、34.79%、37.04%、38.11%、42.25%、18.92%、19.26%、33.50%、38.18%、45.55%和40.50%，表明供试品A1、A2、B2、C1、C2、E2和F2之间的质量一致性较好，供试品品B1、D1、D2、E1和F1与前述样品相比，存在较大的质量差异。同一厂家生产的9批抗病毒颗粒供试品对NA的抑制活性检测结果显示，供试品K1～K9在测试浓度均为0.02 g·mL-1时对NA的抑制率分别是：37.68%、36.18%、31.37%、33.98%、40.36%、33.76%、40.69%、41.08%、40.06%，抑制率平均值是37.24%，单个供试品的抑制率与平均值相比较，抑制活性偏差大小分别为K3（15.76%）、K8（10.32%）、K6（9.36%）、K7（9.26%）、K4（8.74%）、K5（8.39%）、K9（7.57%）、K2（2.84%）、K1（1.17%），表明供试品K1、K2、K9、K5之间的质量一致性较好，而K7、K6、K8、K3与前述供试品存在一定的质量差异。结论：本文成功建立了一种可用于快速评价中药（来源于中药的化学成分或中成药）是否具有体外抗NA活性的分析方法，是对现有NA抑制剂筛选方法的有力补充。利用新方法从12种中药材中筛选得到22个化学成分对NA具有较好的体外抑制活性，为进一步研发抗流感小分子药物提供了候选化合物。