【摘 要】
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目的 构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人外周血淋巴细胞中扩增出骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因,构建BMP-2基因和报告基因EGFP真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES
【机 构】
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目的 构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人外周血淋巴细胞中扩增出骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因,构建BMP-2基因和报告基因EGFP真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫外分光光度计测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2酶切后显示空载体和hBMP-2基因片段长度分别为5.3 kb和366 bp,PCR扩增hBMP-2基因片段长度366 bp,紫外分光光度计测定空载体和含hBMP-2基因的质粒浓度分别为382 mg/L和383 mg/L,测序证实pIRES2-EGFP-hBMP-2载体序列正确.结论 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,可为后续骨修复的基因治疗研究奠定基础。
其他文献
目的 建立1种分离人骨肉瘤细株HMG63肿瘤干细胞新模型.方法 采用无血清干细胞培养基对人骨肉瘤HMG63瘤细浮培养形成细胞球,并予阿霉素耐药处理,把耐药细胞株注入裸鼠体内致瘤,致瘤成功后,在瘤体内注射化疗药顺铂,这样使得骨肉瘤肿瘤干细胞在增殖分化的同时反复富集后,提取细胞培养筛选,这样可获得骨肉瘤干细胞和其亚型.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学、流式细胞仪等鉴定.结果 在无
快速康复外科(FTS)是指在围手术期采取一系列优化措施,以减少或减轻手术患者生理及心理创伤应激反应,达到患者快速康复目的的外科处理程序,其核心是减少机体应激反应[1-3].在食管癌治疗中应用FTS来减少患者创伤应激反应,改善患者免疫功能,对促进术后康复有重要意义.本研究旨在探讨FTS在食管癌治疗中的应用及其对患者免疫功能的调节作用。
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)条件培养液(CM)对香烟烟雾提取物(CSE)致血管内皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响.方法 体外培养血管内皮细胞和MSCs,并提取MSCs-CM.实验分3组:分别为对照组、CSE组、CM+ CSE组.检测3组内皮细胞凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、B淋巴细胞瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白、bcl-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异
目的 探讨诱导人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)分化为成骨细胞过程中表型变化.方法 抽取骨髓分离单个核细胞,用DMEM条件培养基诱导hBMSCs向成骨细胞分化；相差显微镜观察成骨细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,分别应用对硝基苯磷酸盐法和BM-Purple法测定成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)分泌量和含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞ALP mRNA的表达.结果 在诱导第5
目的 观察白细胞介素-17 (IL-17)在糖尿病大鼠肾组织的表达,探讨其参与肾小管-间质病变的机制.方法 55只雄性SD大鼠,随机选择35只以50 mg/kg链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,剩余20只为正常对照组.于2、4周末采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测血、尿中IL-17.4周末采用免疫组织化学染色及Western blot检测肾组织中IL-17、α-平滑肌肌动蛋白(α-S
骨髓间充质干细胞(BMSCs)作为一种治疗神经系统损伤的重要干细胞,可通过调节免疫、分泌神经营养因子以及分化成神经元等参与神经系统损伤的修复[1].BMSCs移植治疗神经系统损伤时,比较非损伤区域,会更多的归巢至损伤部位[2],提示可能有趋化因素介导BMSCs向损伤部位迁移,目前机制尚不明确,其中基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体-4(SDF-1/CXCR4)生物轴是一个重要的影响因素[3-
目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）和Janus激酶信号转导及转录激活因子（JAK—STAT）信号通路抑制剂AG490联合移植对大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤的神经保护作用。方法制备大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。按照随机数字表达分为5组，分别设为sham组、1％二甲基亚砜（DMSO）组、AG490组、BMSCs＋1％DMSO移植组、BMSCs＋AG490移植组。移植治疗后24h，Wes
目的 采用RNA干扰技术（RNAi）技术观察低氧诱导因子-1a（HIF-1a）对人膀胱癌细胞株BIU一87增殖、侵袭及转移的影响。方法体外培养BIU-87细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCIt）和Westernblot检测低氧（90％氮气＋5％氢气＋5％二氧化碳）和常氧下及HIF—lcx—siRNA转染前后BIU-87中HIF-1a、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2
目的 探讨急性时相蛋白检测在消化系统恶性疾病的临床诊断中的意义.方法 采取酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行测定2010年2月到2011年2月间收集的50例消化系统恶性疾病患者(研究组)和同期的50例健康体检对象(对照1组)以及同期的50例消化系统良性疾病患者(对照2组)血清中急性时相蛋白的含量,主要包括C反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-AG)以及α1抗胰蛋白酶(α1-AT)的浓度.
目的 通过对钛表面涂层壳聚糖/PLGA-肝素聚电解质多层膜(CS/PLGA-Hep PEMs)来改善材料的血液相容性.方法 (1)采用双次乳化法制备装载肝素的PLGA纳米粒(PLGA-HepNPs)；(2)利用层层自组装技术,在钛表面构建壳聚糖和PLGA-肝素纳米粒聚电解质多层膜；(3)对钛表面涂层进行理化分析；(4)评价该聚电解质多层膜的体外血液相容性.结果 (1)PLGA-肝素自组装形成的聚电