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摘 要 由于禽流感毒株的不断变异，为了有效防控禽流感疫情的发生，农业部推广使用重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗，为了保证该疫苗能够安全有效的使用，福建省福安市溪潭镇畜牧兽医站进行了小范围应用试验。
关键词 高致病性；禽流感；疫苗；免疫；应用试验
中图分类号：S831.7 文献标志码：A 文章编号：
高致病性禽流感是一种人畜共患病，在特定环境下，可感染人，当人感染高致病性禽流感后，死亡率较高，并且严重危害公共安全卫生，去年农业部推出重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗，为了保证新疫苗的安全使用，动物疫病预防控制中心在新疫苗大批使用前先做小范围试验。
1 试验材料
1.1 试验动物
挑选一个1 000只蛋鸡养殖户进行免疫。
1.2 实验疫苗
农业部发放的重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活 （Re-4+Re-6）疫苗（生产厂家：青岛易邦生物工程有限公司批准文号：兽药生字（2012）150132192）。
2 免疫步骤
2.1 免疫前准备
在实验前，将所用注射器采用高压锅灭菌的方法进行消毒，（121℃，30min），准备一次用针头共计1 100只，75%酒精棉球，免疫时使用一次性手套、防护帽子和脚套。进入养殖场的车辆要进行彻底消毒。
2.2 免疫过程
2012年6月19日夜晚，在鸡群都上架且鸡群安静的情况下，对鸡群免疫注射了重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6） 疫苗，按照免疫注射规程进行免疫注射，注射免疫完成后观察鸡群有无异常情况。
2.3 免疫时注意事项
①禽流感病毒疫苗感染鸡或健康状况异常的鸡群切忌使用。
②在保存疫苗的过程中严禁冻结疫苗。
③疫苗若出现破损、异物或破乳等异常现象切忌使用。
④使用前应将疫苗恢复至常温，使用时充分摇匀。
3 免疫抗体监测
3.1 3-1采样工作
免疫完成21 d后，按照10%的比例随机抽取100只鸡进行翅静脉采样，准备好无菌一次性试管和2 mL无菌注射器，按照北京市动物采血规程进行采样，在采样过程中，将血液摆放成一个斜边，这样能有利于血清的析出，采样完成后要将采血的试管用酒精灯进行封口，防止在运输途中出现洒漏现象，影响抗体检测的准确性。
3.2 3-2抗体检测
3.2.1 3-2-1抗体检测的试验地点
将采回的血样送到动物疫病预防控制中心化验室。
3.2.2 3-2-2抗体检测试剂
试剂来源为：为中国农科院哈尔滨兽医研究所生产。AI-H5N1 Re-4批号是201001；阳性血清批号200601；AI-H5N1 Re-6批号是2012001；阳性血清批号2012001；稀释液由有资质的生产场家提供，并按试验要求调好pH值。
3.3 3-3-3抗体检测的方法
血凝试验和血凝抑制试验；严格按照国标方法（GB/T18936-2003）进行检测。
4 免疫抗体判定
①禽流感抗体检测水平，血凝抑制（ HI）抗体水平大于或者等于4log2时，判定为免疫效力良好。
②血凝抑制（HI）抗体水平大于或者等于4log2的血样占被检测血样数量≥70%，为鸡群群体免疫合格。3-3-4抗体检测结果如下。
表1 抗体结果分析（表1）
类型 ㏒1 ㏒2 ㏒3 ㏒4 ㏒5 ㏒6 ㏒7 ㏒8 ㏒9 ≥㏒10 合格率%
AI-H5N1 Re-4 1 7 15 14 10 3 100
AI-H5N1 Re-4 5 18 20 6 1 100
5 实验结论
①免疫重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗后，试验鸡鸡群精神状态良好、采食、饮水正常、产蛋率等指标未发生明显的变化，且鸡群无死亡现象。
②通过此次试验和免疫抗体的监测可以看出，重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗对禽流感Re-4、Re-6毒株有保护作用，免疫合格率可以达到100%。
（责任编辑：赵中正）
关键词 高致病性；禽流感；疫苗；免疫；应用试验
中图分类号：S831.7 文献标志码：A 文章编号：
高致病性禽流感是一种人畜共患病，在特定环境下，可感染人，当人感染高致病性禽流感后，死亡率较高，并且严重危害公共安全卫生，去年农业部推出重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗，为了保证新疫苗的安全使用，动物疫病预防控制中心在新疫苗大批使用前先做小范围试验。
1 试验材料
1.1 试验动物
挑选一个1 000只蛋鸡养殖户进行免疫。
1.2 实验疫苗
农业部发放的重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活 （Re-4+Re-6）疫苗（生产厂家：青岛易邦生物工程有限公司批准文号：兽药生字（2012）150132192）。
2 免疫步骤
2.1 免疫前准备
在实验前，将所用注射器采用高压锅灭菌的方法进行消毒，（121℃，30min），准备一次用针头共计1 100只，75%酒精棉球，免疫时使用一次性手套、防护帽子和脚套。进入养殖场的车辆要进行彻底消毒。
2.2 免疫过程
2012年6月19日夜晚，在鸡群都上架且鸡群安静的情况下，对鸡群免疫注射了重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6） 疫苗，按照免疫注射规程进行免疫注射，注射免疫完成后观察鸡群有无异常情况。
2.3 免疫时注意事项
①禽流感病毒疫苗感染鸡或健康状况异常的鸡群切忌使用。
②在保存疫苗的过程中严禁冻结疫苗。
③疫苗若出现破损、异物或破乳等异常现象切忌使用。
④使用前应将疫苗恢复至常温，使用时充分摇匀。
3 免疫抗体监测
3.1 3-1采样工作
免疫完成21 d后，按照10%的比例随机抽取100只鸡进行翅静脉采样，准备好无菌一次性试管和2 mL无菌注射器，按照北京市动物采血规程进行采样，在采样过程中，将血液摆放成一个斜边，这样能有利于血清的析出，采样完成后要将采血的试管用酒精灯进行封口，防止在运输途中出现洒漏现象，影响抗体检测的准确性。
3.2 3-2抗体检测
3.2.1 3-2-1抗体检测的试验地点
将采回的血样送到动物疫病预防控制中心化验室。
3.2.2 3-2-2抗体检测试剂
试剂来源为：为中国农科院哈尔滨兽医研究所生产。AI-H5N1 Re-4批号是201001；阳性血清批号200601；AI-H5N1 Re-6批号是2012001；阳性血清批号2012001；稀释液由有资质的生产场家提供，并按试验要求调好pH值。
3.3 3-3-3抗体检测的方法
血凝试验和血凝抑制试验；严格按照国标方法（GB/T18936-2003）进行检测。
4 免疫抗体判定
①禽流感抗体检测水平，血凝抑制（ HI）抗体水平大于或者等于4log2时，判定为免疫效力良好。
②血凝抑制（HI）抗体水平大于或者等于4log2的血样占被检测血样数量≥70%，为鸡群群体免疫合格。3-3-4抗体检测结果如下。
表1 抗体结果分析（表1）
类型 ㏒1 ㏒2 ㏒3 ㏒4 ㏒5 ㏒6 ㏒7 ㏒8 ㏒9 ≥㏒10 合格率%
AI-H5N1 Re-4 1 7 15 14 10 3 100
AI-H5N1 Re-4 5 18 20 6 1 100
5 实验结论
①免疫重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗后，试验鸡鸡群精神状态良好、采食、饮水正常、产蛋率等指标未发生明显的变化，且鸡群无死亡现象。
②通过此次试验和免疫抗体的监测可以看出，重组禽流感病毒H 5亚型二价灭活（Re-4+Re-6）疫苗对禽流感Re-4、Re-6毒株有保护作用，免疫合格率可以达到100%。
（责任编辑：赵中正）