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目的
研究血根碱(SAN)对TGF-β1诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)向间质细胞转化的影响,并探讨其发生机制。
方法使用TGF-β1(10 μg/L)刺激HUVEC,观察不同浓度SAN对TGF-β1诱导HUVEC向间质细胞转化的影响。采用CCK8检测不同浓度SAN对HUVEC细胞活性的影响;在倒置相差显微镜下观察HUVEC形态学的改变;采用实时半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中collagen-1,fibronectin,N-cadherin的基因表达水平;免疫印迹法检测细胞中p-Smad2, Smad2, p-Smad3,Smad3的蛋白表达量。
结果CCK8结果显示:不同浓度SAN干预HUVEC 72 h后,细胞活性无明显改变;光学显微镜下观察到HUVEC在正常情况下呈规则的铺路石样生长,TGF-β1作用于细胞后可见细胞形态向长梭形转变,而当SAN(0.25 μmol/L)与TGF-β1同时作用时则可显著逆转这一现象;RT-PCR结果显示TGF-β1可显著上调HUVEC胞内collagen-1,fibronectin,N-cadherin的基因表达水平,当SAN与TGF-β1同时作用时,可明显逆转这种现象;WB结果显示,在TGF-β1的作用下,p-Smad2和p-Smad3表达增加,而当SAN与TGF-β1同时作用时可逆转这一现象。
结论SAN可抑制TGF-β1诱导的HUVEC向间质细胞转化,提示其对于治疗心肌纤维化疾病可能具有重要的作用。