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目的:
体外建立骨肉瘤多药耐药模型(R-OS-732)。
方法:小剂量递增阿霉素浓度与骨肉瘤细胞(OS-732)连续培养,使阿霉素浓度达30ng/ml,总体培养6个月,共传代49次,初步建立体外骨肉瘤多药耐药模型(R-OS-732)。应用组织学技术判断R-0S-732和OS-732细胞的形态学差异。应用免疫组化技术检测P-糖蛋白(P-170蛋白)、拓扑异构酶-Ⅱ(TOPO-Ⅱ)、谷胱甘肽-巯基转移酶(GST)在R-OS-732和OS-732细胞中的表达。应用MTT比色法测定阿霉素(DOX)、长春新碱(VCR)、氨甲喋呤(MTX)、鬼臼乙甙(VP-16)、环磷酰胺(EX)对R-OS-732和OS-732细胞活性的影响,并用Origin统计软件的直线回归方程推算相应的IC50值,同时进行统计学处理。
结果:形态学上两组细胞无明显差异,P-170蛋白、GST在OS-732细胞中呈阴性表达,而TOPO-Ⅱ呈弱阳性;在R-OS-732细胞中,P-170蛋白、GST、TOPO-Ⅱ均呈阳性表达。DOX、VCR、MTX对R-OS-732细胞的IC50值均高于OS-732细胞(P<0.05),而VP-16、EX对两组细胞的IC50值差异无显著性意义(P>0.05)。
结论:小剂量递增阿霉素浓度诱导而建立的骨肉瘤体外多药耐药模型(R-OS-732)可靠,细胞表现出明显耐药,对阿霉素耐药倍数达30以上,同时表现出对MTX、VCR不同程度的耐药,可应用此模型对多药耐药的发生机制及体外逆转多药耐药进行研究。