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摘要：从巴州地区不同奶牛养殖场采集乳样24份，进行分离鉴定葡萄球菌属细菌，采用琼脂扩散法对分离株进行抗生素敏感性研究。结果：获得了5种葡萄球菌属细菌，分别是金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌、缓慢葡萄球菌、克氏葡萄球菌、溶酪葡萄球菌。分离到的5种细菌对庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林高度敏感;对卡那霉素，甲氧苄啶中度敏感;对青霉素、红霉素、万古霉素、四环素、利福平耐药。说明巴州地区奶牛养殖场乳中细菌的耐药现象还比较严重。
关键词：葡萄球菌属;分离鉴定;药敏试验
中圖分类号：S852.611
文献标识码：B
doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.15.002
作者简介：姜云，女，学士，高级畜牧师，研究方向：从事家畜遗传育种、动物疫病诊疗防治。
0引言
奶牛隐性乳房炎作为一种常见疾病，严重影响奶牛业的发展。奶牛乳房炎发病原因多，通常是由多种非特定病原微生物感染引起，以金黄色葡萄球菌最常见。试验从巴州不同奶牛养殖场采集乳样24份，分离鉴定葡萄球菌属细菌，采用琼脂扩散法对分离株进行抗生素敏感性研究。
1材料
1.1样品来源
采自巴州地区3个不同奶牛场，牛只乳房用乳头药浴液消毒后，每个乳头挤去头2～3把乳，无菌取乳样10mL，共24个乳样（分次进行），贴好标签4h内进行检验[1]。
1.2培养基
普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基（含结晶紫）三糖铁琼脂、鲜血琼脂培养基、高盐甘露醇琼脂、营养肉汤[2]。
1.3生化试剂
各种细菌培养基生化试验管及药敏片均购于杭州天和微生物试剂有限公司。
2方法
2.1细菌分离及鉴定
无菌取乳样分别接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，在37℃恒温箱培养24 h后，观察平皿上菌落形态、大小、颜色、溶血性等，将菌落分类，每一类典型菌落进行涂片镜检[3]。采用革兰氏染色，区分阴性菌和阳性菌，并判定细菌类属，并将其进一步纯化培养。将葡萄球菌属进行直接分离培养（普通琼脂平板、普通琼脂血平板）和选择性分离培养（高盐甘露醇琼脂）。取已纯培养好的菌种，分别接种血琼脂平板、普通琼脂平板、甘露醇等生化培养基，37℃培养18～24 h，置室温24 h，观察其生长表现、溶血情况和色素变化;同时接种普通肉汤，37℃培养18～24 h后做血浆凝固酶试验，对可疑单个菌落涂片、染色、镜检，进一步观察其在鉴别培养基上的生长情况，并纯化培养菌落，保存备用[4]。
2.2药敏试验
利用纸片琼脂扩散法对5株分离到的葡萄球菌菌株的抗生素敏感性进行检测。取营养肉汤增菌培养后的菌液，用移液枪吸取100uL均匀涂抹到整个营养琼脂培养基上，贴药敏片，37℃倒置培养24～48 h，后判定结果参照美国实验室标准委员会（NCCIS）法规[5]。
3结果与分析
3.1细菌分离及鉴定
细菌分离纯化后，根据镜检，生化试验结果，参考相关文献认为分离到了5种葡萄球菌属的细菌。分别是木糖葡萄球菌为革兰氏阳性菌球菌，成单个成双及不规则葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径为0.5～1 μm。缓慢葡萄球菌为革兰氏阴性球菌。克氏葡萄球菌比其他球菌大。5种细菌的生化鉴定试验结果见表1。
3.2药敏试验
研究选用了12种不同类型的常见抗生素检测葡萄球菌抗药性，结果表明5种葡萄球菌属细菌对庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林高度敏感，对卡那霉素，甲氧苄啶中度敏感。对青霉素、红霉素、万古霉素、四环素、利福平耐药，说明几个奶牛场乳中葡萄球菌属的细菌耐药现象比较严重。
注：S为高度敏感，I为中度敏感，R为耐药。-表示无抑菌直径。
4讨论与结论
（1）搞好圈舍环境卫生，保持牛舍、牛床和牛体清洁，接奶前应对乳房、挤奶员和自动挤奶器加强清洗消毒，定期进行奶牛隐性乳房炎检测。
（2）发现感染金黄色葡萄球菌的奶牛，及时用药治疗，最好分开饲养、挤奶，避免交叉感染，治愈率低的奶牛建议淘汰处理。
（3）在治疗金黄色葡萄球菌性乳房炎时，要通过实验室细菌培养和药敏试验结果，选用高度敏感和针对性强的抗生素进行治疗，治愈后要对乳中的药物残留进行严格监测。
（4）选用中草药治疗，既不易产生抗药性及药物残留，又有药物与营养剂双重功能。
（5）疫苗预防。目前市场上出售的疫苗大多为灭活苗，但这种疫苗存在感染的风险性、广谱性弱。
参考文献
[1]李宏胜，郁杰，李新圃，等.我国部分地区个体奶牛场乳房炎细菌学调查[J].中兽医医药杂志，2002 （6）：14-17.
[2]袁永隆，张礼华，刘纯传，等.我国奶牛乳房炎常见病原菌的区系调查[J].中国农业科学，1992，25 （4）：70-76.
[3]贾国勇，魏海红.乳源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性监测[J].上海畜牧兽医通讯，2008 （3）：36-38.
[4]王晓兰，孙庆华.奶牛隐性型乳房炎奶样中葡萄球菌的研究[J].安徽农业科学，2006，34（ lO）：2 153，2 156.
[5]高攀，王登峰，李建军，等.新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查[J].新疆农业科学，2012，49（ ll）：2134-2139.
关键词：葡萄球菌属;分离鉴定;药敏试验
中圖分类号：S852.611
文献标识码：B
doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.2019.15.002
作者简介：姜云，女，学士，高级畜牧师，研究方向：从事家畜遗传育种、动物疫病诊疗防治。
0引言
奶牛隐性乳房炎作为一种常见疾病，严重影响奶牛业的发展。奶牛乳房炎发病原因多，通常是由多种非特定病原微生物感染引起，以金黄色葡萄球菌最常见。试验从巴州不同奶牛养殖场采集乳样24份，分离鉴定葡萄球菌属细菌，采用琼脂扩散法对分离株进行抗生素敏感性研究。
1材料
1.1样品来源
采自巴州地区3个不同奶牛场，牛只乳房用乳头药浴液消毒后，每个乳头挤去头2～3把乳，无菌取乳样10mL，共24个乳样（分次进行），贴好标签4h内进行检验[1]。
1.2培养基
普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基（含结晶紫）三糖铁琼脂、鲜血琼脂培养基、高盐甘露醇琼脂、营养肉汤[2]。
1.3生化试剂
各种细菌培养基生化试验管及药敏片均购于杭州天和微生物试剂有限公司。
2方法
2.1细菌分离及鉴定
无菌取乳样分别接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，在37℃恒温箱培养24 h后，观察平皿上菌落形态、大小、颜色、溶血性等，将菌落分类，每一类典型菌落进行涂片镜检[3]。采用革兰氏染色，区分阴性菌和阳性菌，并判定细菌类属，并将其进一步纯化培养。将葡萄球菌属进行直接分离培养（普通琼脂平板、普通琼脂血平板）和选择性分离培养（高盐甘露醇琼脂）。取已纯培养好的菌种，分别接种血琼脂平板、普通琼脂平板、甘露醇等生化培养基，37℃培养18～24 h，置室温24 h，观察其生长表现、溶血情况和色素变化;同时接种普通肉汤，37℃培养18～24 h后做血浆凝固酶试验，对可疑单个菌落涂片、染色、镜检，进一步观察其在鉴别培养基上的生长情况，并纯化培养菌落，保存备用[4]。
2.2药敏试验
利用纸片琼脂扩散法对5株分离到的葡萄球菌菌株的抗生素敏感性进行检测。取营养肉汤增菌培养后的菌液，用移液枪吸取100uL均匀涂抹到整个营养琼脂培养基上，贴药敏片，37℃倒置培养24～48 h，后判定结果参照美国实验室标准委员会（NCCIS）法规[5]。
3结果与分析
3.1细菌分离及鉴定
细菌分离纯化后，根据镜检，生化试验结果，参考相关文献认为分离到了5种葡萄球菌属的细菌。分别是木糖葡萄球菌为革兰氏阳性菌球菌，成单个成双及不规则葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径为0.5～1 μm。缓慢葡萄球菌为革兰氏阴性球菌。克氏葡萄球菌比其他球菌大。5种细菌的生化鉴定试验结果见表1。
3.2药敏试验
研究选用了12种不同类型的常见抗生素检测葡萄球菌抗药性，结果表明5种葡萄球菌属细菌对庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林高度敏感，对卡那霉素，甲氧苄啶中度敏感。对青霉素、红霉素、万古霉素、四环素、利福平耐药，说明几个奶牛场乳中葡萄球菌属的细菌耐药现象比较严重。
注：S为高度敏感，I为中度敏感，R为耐药。-表示无抑菌直径。
4讨论与结论
（1）搞好圈舍环境卫生，保持牛舍、牛床和牛体清洁，接奶前应对乳房、挤奶员和自动挤奶器加强清洗消毒，定期进行奶牛隐性乳房炎检测。
（2）发现感染金黄色葡萄球菌的奶牛，及时用药治疗，最好分开饲养、挤奶，避免交叉感染，治愈率低的奶牛建议淘汰处理。
（3）在治疗金黄色葡萄球菌性乳房炎时，要通过实验室细菌培养和药敏试验结果，选用高度敏感和针对性强的抗生素进行治疗，治愈后要对乳中的药物残留进行严格监测。
（4）选用中草药治疗，既不易产生抗药性及药物残留，又有药物与营养剂双重功能。
（5）疫苗预防。目前市场上出售的疫苗大多为灭活苗，但这种疫苗存在感染的风险性、广谱性弱。
参考文献
[1]李宏胜，郁杰，李新圃，等.我国部分地区个体奶牛场乳房炎细菌学调查[J].中兽医医药杂志，2002 （6）：14-17.
[2]袁永隆，张礼华，刘纯传，等.我国奶牛乳房炎常见病原菌的区系调查[J].中国农业科学，1992，25 （4）：70-76.
[3]贾国勇，魏海红.乳源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性监测[J].上海畜牧兽医通讯，2008 （3）：36-38.
[4]王晓兰，孙庆华.奶牛隐性型乳房炎奶样中葡萄球菌的研究[J].安徽农业科学，2006，34（ lO）：2 153，2 156.
[5]高攀，王登峰，李建军，等.新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查[J].新疆农业科学，2012，49（ ll）：2134-2139.