【摘 要】
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目的 原核表达旋毛虫抗肿瘤基因A200711,并纯化该蛋白,CCK-8检测其对H7402人肝癌细胞的生长抑制作用.方法 PCR获得A200711基因片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-A200711,转入
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所,白求恩医学院
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目的 原核表达旋毛虫抗肿瘤基因A200711,并纯化该蛋白,CCK-8检测其对H7402人肝癌细胞的生长抑制作用.方法 PCR获得A200711基因片段,构建重组表达载体pET-28a(+)-A200711,转入大肠杆菌Rosetta(DE3).SDS-PAGE及Western blot检测IPTG诱导后重组菌,采用Ni-NTA亲合层析柱纯化并柱上复性目的 蛋白.细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测A200711蛋白对H7402细胞的生长抑制作用.结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-A200711,目的 蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE及Western blot分析显示,相对分子量约22 KD处出现目的 蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲合层析柱获得了高纯度可溶性的A200711蛋白;H7402细胞增殖抑制率与A200711蛋白浓度存在量效关系,同时随作用时间的延长增殖抑制率也明显增加.结论 成功克隆、表达并纯化了旋毛虫A200711蛋白.A200711蛋白可抑制H7402细胞的增殖,且呈现时效和量效关系,本研究表明旋毛虫A200711蛋白作为潜在的抗肝癌生物制剂有进一步研究的价值.
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