论文部分内容阅读
摘要：目的 建立H PLC法测定苦参洗剂中苦参碱的含量。方法 采用C18（5μm，4.6×250m m）为色谱柱，以：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠（含0.2%磷酸，1%高氯酸钠）（23：77）流动相，检测波长为220nm，流速为1.0mL/min。结果 苦参碱在204.6～1023μg/mL范围内呈现良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为98.18%，RSD =1.08%。结论 本法简便、准确，重现性好，可作为苦参洗剂的质量控制方法。
关键词：苦参洗剂；HPLC；苦参碱
中图分类号： 文献标志码： 文章编号：1007-2349（2017）02-0085-03
苦参洗剂为临床经验方，由苦参、地肤子、冰片、红花等8味中药组成的复方中药制剂，具有清热解毒、燥湿止痒、消肿止痛的功效，临床上广泛用于瘙痒性及炎症性皮肤病。方中苦参为君药，具有清热燥湿，杀虫，利尿的功效，外治用于赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；滴虫性阴道炎等疾病[1]，其主要活性成分为生物碱类成分，生物碱成分中主要含有苦参碱，而且苦参碱的测定方法已较成熟，故对本研究选择苦参碱作为定量指标，采用高效液相色谱法直接测定苦参碱的含量，该方法专属性强、简便准确、重复性好，现将结果报道如下。
1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。苦参碱对照品对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：1100805-200306）；苦参洗剂（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18柱（250 mmx4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（含0.2%磷酸，1%高氯酸钠）（23：77）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：220 nm；进样量10 μL。在此条件下，苦参碱与其他色谱峰分离良好，理论板数以苦参碱计算，应不低于3000.
2.2 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品，精密称取苦参碱对照品10.23 mg置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液（每1 mL含苦参碱204.6 μg）。再精密量取对照品储备液5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱对照品溶液（40.92 μg/mL）[2]。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取本品5 mL，用稀盐酸调pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，弃去石油醚液，水层用0.5%氢氧化钠溶液调pH值至9～10，用三氯甲烷萃取4次，每次用量15 mL，合并三氯甲烷层，加无水硫酸钠脫水，三氯甲烷液置水浴中蒸至5 mL，过中性氧化铝柱，以三氯甲烷60 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL量瓶中 稀释至刻度，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液[3]。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方取缺当归的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与苦参碱相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰苦参碱的测定。
2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，苦参碱的回归方程为Y=1058.3X-457.6，r=0.9998，表明进样量在204.6～1023 μg/mL范围内，线性关系良好。
2.6 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定苦参碱峰面积值，计算苦参碱RSD为1.13%，结果表明精密度良好。
2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定，记录苦参碱面积，结果RSD为1.54%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8 重复性实验 精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定苦参碱的含量，计算苦参碱RSD为1.58%，表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率实验 采用加样回收法测定，精密移取已知含量的样品（批号：130706）0.5 mL，精密加入苦参碱对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
2.10 样品测定 取3批样品，精密移取本品5 mL，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10 μL进样。结果见表2。
3 讨论
苦参药材中苦参碱的法定测定方法是用浓氨试液，加三氯甲烷，超声提取，以乙腈-无水乙醇为流动相[4]，试验中曾考察了苦参碱不同的提取方法[4，5]，效果不佳，最终采用稀盐酸调pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，弃去石油醚液，水层用0.5%氢氧化钠溶液调pH值至9～10，用三氯甲烷萃取来提取苦参碱，过中性氧化铝柱，排除了干扰。采用的流动相是甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（含0.2%磷酸，1%高氯酸钠）（23：77），在此色谱条件下，可使苦参碱分离良好，峰形较好，理论板数高。试验中采用曾考察了三氯甲烷萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，结果表明，萃取4次，与乙酸乙酯萃取5次，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择三氯甲烷萃取4次，同时对三氯甲烷每次萃取用量做了比较，分别每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，结果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故选择三氯甲烷萃取，每次15 mL。
参考文献：
[1]邵蓉，张仲源，管营杰.苦参在妇科疾病外治中的药理作用[J].中国医药指南，2015，13（28）：39-40.
[2]陈香.HPLC法测定尿毒清颗粒中苦参碱的含量[J].黑龙江医药，2015，28（5）：1017-1019.
[3]张智军，崔华，马久太.HPLC法测定肤疾洗剂中苦参碱的含量[J].世界中医药，2 012，7（5）：457-459.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，188.
[5]赵骏，齐喜红.生物碱提取方法研究概述[J].天津中医学学报，2003，22（4）：43-44.
（收稿日期：2016-10-11）
关键词：苦参洗剂；HPLC；苦参碱
中图分类号： 文献标志码： 文章编号：1007-2349（2017）02-0085-03
苦参洗剂为临床经验方，由苦参、地肤子、冰片、红花等8味中药组成的复方中药制剂，具有清热解毒、燥湿止痒、消肿止痛的功效，临床上广泛用于瘙痒性及炎症性皮肤病。方中苦参为君药，具有清热燥湿，杀虫，利尿的功效，外治用于赤白带下，阴肿阴痒，湿疹，湿疮，皮肤瘙痒，疥癣麻风；滴虫性阴道炎等疾病[1]，其主要活性成分为生物碱类成分，生物碱成分中主要含有苦参碱，而且苦参碱的测定方法已较成熟，故对本研究选择苦参碱作为定量指标，采用高效液相色谱法直接测定苦参碱的含量，该方法专属性强、简便准确、重复性好，现将结果报道如下。
1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（四元泵，DAD检测器，自动进样器），Agilent1200工作站；BP211D型电子分析天平（德国Sartoius）。苦参碱对照品对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：1100805-200306）；苦参洗剂（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18柱（250 mmx4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（含0.2%磷酸，1%高氯酸钠）（23：77）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：220 nm；进样量10 μL。在此条件下，苦参碱与其他色谱峰分离良好，理论板数以苦参碱计算，应不低于3000.
2.2 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品，精密称取苦参碱对照品10.23 mg置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液（每1 mL含苦参碱204.6 μg）。再精密量取对照品储备液5 mL置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱对照品溶液（40.92 μg/mL）[2]。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取本品5 mL，用稀盐酸调pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，弃去石油醚液，水层用0.5%氢氧化钠溶液调pH值至9～10，用三氯甲烷萃取4次，每次用量15 mL，合并三氯甲烷层，加无水硫酸钠脫水，三氯甲烷液置水浴中蒸至5 mL，过中性氧化铝柱，以三氯甲烷60 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL量瓶中 稀释至刻度，定容，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液[3]。
2.4 阴性对照溶液的制备 按处方取缺当归的阴性对照药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与苦参碱相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰苦参碱的测定。
2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25 μL进样，以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，苦参碱的回归方程为Y=1058.3X-457.6，r=0.9998，表明进样量在204.6～1023 μg/mL范围内，线性关系良好。
2.6 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10 μL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定苦参碱峰面积值，计算苦参碱RSD为1.13%，结果表明精密度良好。
2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h测定，记录苦参碱面积，结果RSD为1.54%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8 重复性实验 精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定苦参碱的含量，计算苦参碱RSD为1.58%，表明本方法重复性良好。
2.9 加样回收率实验 采用加样回收法测定，精密移取已知含量的样品（批号：130706）0.5 mL，精密加入苦参碱对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。
2.10 样品测定 取3批样品，精密移取本品5 mL，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10 μL进样。结果见表2。
3 讨论
苦参药材中苦参碱的法定测定方法是用浓氨试液，加三氯甲烷，超声提取，以乙腈-无水乙醇为流动相[4]，试验中曾考察了苦参碱不同的提取方法[4，5]，效果不佳，最终采用稀盐酸调pH值至3～4，用石油醚（60℃～90℃）萃取4次，每次用量15 mL，弃去石油醚液，水层用0.5%氢氧化钠溶液调pH值至9～10，用三氯甲烷萃取来提取苦参碱，过中性氧化铝柱，排除了干扰。采用的流动相是甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钠（含0.2%磷酸，1%高氯酸钠）（23：77），在此色谱条件下，可使苦参碱分离良好，峰形较好，理论板数高。试验中采用曾考察了三氯甲烷萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，结果表明，萃取4次，与乙酸乙酯萃取5次，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择三氯甲烷萃取4次，同时对三氯甲烷每次萃取用量做了比较，分别每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，结果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故选择三氯甲烷萃取，每次15 mL。
参考文献：
[1]邵蓉，张仲源，管营杰.苦参在妇科疾病外治中的药理作用[J].中国医药指南，2015，13（28）：39-40.
[2]陈香.HPLC法测定尿毒清颗粒中苦参碱的含量[J].黑龙江医药，2015，28（5）：1017-1019.
[3]张智军，崔华，马久太.HPLC法测定肤疾洗剂中苦参碱的含量[J].世界中医药，2 012，7（5）：457-459.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010，188.
[5]赵骏，齐喜红.生物碱提取方法研究概述[J].天津中医学学报，2003，22（4）：43-44.
（收稿日期：2016-10-11）