【摘 要】
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目的 构建TGF-β1基因的重组腺相关病毒载体并将其转入兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞(SMSCs)中,对转染后外源性TGF-β1 mRNA和蛋白的表达进行检测.方法 含TGF-β1全长cDNA的
【机 构】
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武汉大学口腔生物医学工程教育部重点实验室武汉大学中南医院,430079武汉大学口腔医院颌面外科;
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目的 构建TGF-β1基因的重组腺相关病毒载体并将其转入兔颞下颌关节滑膜间充质干细胞(SMSCs)中,对转染后外源性TGF-β1 mRNA和蛋白的表达进行检测.方法 含TGF-β1全长cDNA的质粒pCMV6-XL4和质粒pAAV-MCS用EcoR Ⅰ+Xba Ⅰ进行双酶切后连接,转化大肠杆菌DHSα感受态细胞,获得重组质粒pAAV-MCS-TGF-β1.通过酶切和DNA测序鉴定重组质粒的正确性.采用磷酸钙共沉淀法,以重组质粒pAAV-MCS-TGF-β1和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,产生具有传染性的病毒颗粒;斑点杂交方法检测重组病毒的滴度,并转染体外培养的SMSCs.以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测目的 基因及蛋白的表达.结果 成功地构建TGF-β1基因腺相关病毒重组质粒,病毒滴度约为3.6×1013vp/ml,感染的SMSCs能稳定、高效地表达外源性目的 基因及蛋白.结论 重组腺相关病毒载体rAAV-TGF-β1能有效感染SMSCs并表达目的基因.
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