【摘 要】
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目的: 建立能够稳定表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3, GPC3)的细胞株, 制备抗人GPC3的单克隆抗体(mAb).方法: 利用脂质体技术将GPC3重组质粒导入NIH3T3细胞, RT-PCR检
【机 构】
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深圳大学生化工程技术研究中心,广东,深圳,518057
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目的: 建立能够稳定表达人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3, GPC3)的细胞株, 制备抗人GPC3的单克隆抗体(mAb).方法: 利用脂质体技术将GPC3重组质粒导入NIH3T3细胞, RT-PCR检测; 以原核表达的GPC3片段为免疫原, 经传统的杂交瘤技术获得稳定分泌抗免疫原的mAb细胞株, Western blot和免疫荧光技术鉴定mAb特性.结果: 成功获得一株稳定表达GPC3的细胞株, 即NIH3T3-GPC3; 建立5株能稳定分泌抗原核表达GPC3片段抗原的mAb细胞株.mAb细胞株的免疫球蛋白亚类是IgG2a.间接ELISA、Western blot和免疫荧光实验的结果证明, 仅杂交瘤GPC34H11能分泌与完整的人GPC3蛋白结合的mAb.结论: 建立稳定表达GPC3的鼠源模型细胞株; 获得识别天然GPC3分子的mAb细胞株.
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