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【摘要】目的：探究荧光定量聚合酶链反应（quantitative.fluorescent.polymerase.chain.reaction，QF-PCR）技术在常见染色体非整倍体检测中的应用效果。方法：选取2019年1月至2020.年.12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比。结果：在500例样本中，通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。结论：QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中具有很大的应用价值，在临床检测中的应用效果较好
【关键词】荧光定量聚合酶链反应技术；染色体非整倍体；产前诊断；核型分析
【中图分类号】R596.1.【文献标识码】A.【文章编号】2096-5249（2021）14-0147-02
染色体非整体倍体异常是一种比较常见的染色数目异常情况，包括21三体综合征、18三体综合征、13三体综合征、三倍体、性染色体数目异常，这些疾病将会胎儿的生命安全造成极大的隐患，如宫内死胎、流产等，患儿在出身后存在不同程度的智力缺陷、生长发育比较迟缓，甚至存在畸形组织器官，会给患者的家庭带来沉重的影响[1]。目前治疗染色体异常的方法还在探索阶段，临床上主要通过产前筛查染色体异常，进行产前干预，以提高新生儿的出生质量[2]。随着科学技术的发展，相关研究发现[3]，荧光定量聚合酶链反应（quantitative fluorescent polymerase chain reaction，QF-PCR）技术能够快速诊断染色体非整倍体，本研究选取2019年1月至2020 年 12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比，探究QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中的应用。
1？资料与方法
1.1.一般资料
选取2019年1月至2020年12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体。按照常规培养、收获、制片G显带，按照相关标准进行核型分析。
1.2.方法
在B超引导下，对绒毛、羊水或者脐血穿刺取样，开展染色体核型分析与QF-PCR检测。染色体核型分析按照常规的细胞培养、收获、制片G显带，按照相关标准开展核型分析。QF-PCR检测主要分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。STR定点使用广州达瑞生物技术股份有限公司非整倍体检测试剂盒，共标测了20位点，包括21号染色体的6个STR位点，18号染色体的4个STR位点，13号染色体有4个STR位点，性染色体6个STR位点，包括按照相关标准提取绒毛、羊水或者脐血标本的DNA，在扩增仪上扩增，以95 ℃持续5 min预变性、然后用94 ℃30 s、60 ℃60 s、70 ℃60 s，循环25次左右，再以60 ℃延伸1 h，将扩增的产物放于4 ℃的环境中避光保存。取甲酰胺8.5 μL，分子质量标记物0.5 μL，PCR扩增产物1.0 μL，放在冰水上迅速冷却 3 min，进行毛细管电泳。
1.3.观察指标
重点观察500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，尤其是DXS6809、DXS9895、AMEL、TAF9L、ZFXY、SRY、XHPRT；D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325位点的变化。
2？结果
在500例样本中，通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。
3？讨论
染色体数目发生异常或是结构发生畸形，是导致新生儿出现缺陷的主要原因，染色体异常的发生率通常在1/160，其中最为常见的为21、18、13三体、性染色体异常。患有染色体异常的患儿通常表现为智力低下、生长迟缓、畸形的症状[4]，会给患儿带来巨大的伤害。目前并没有效果较好的治疗方法，患儿的出生会给患儿的家庭以及患兒本身造成极大的伤害，患儿将承担巨大的疾病痛苦，而家庭需要承受沉重的经济负担。在诊断技术没有得到普及时，染色体异常患者由于发育比较迟缓，会伴随行为或者学习的障碍，在青春期容易出现发育异常，在成年以后易发生不孕不育，对患者本人来说是非常严重的影响，患者的家庭也承受着巨大的痛苦。
当前，各个地区大力提倡婚前、孕前检查，以及产前筛查、诊断，目的在于及早防控，以提高新生儿的质量[5]，稳定社会的和谐，避免悲剧的发生。相关的研究认为[6]，不同孕妇年龄与检出染色体异常之间存在联系，因此孕妇高龄被列为风险指标，其他风险因素还包括唐筛高风险、无创产前基因检测高风险、胎儿超声异常、夫妻双方患有珠蛋白生成障碍性贫血、不良生育史、染色体异常家族史等。每种综合征的表现并不相同，一些患儿可能只有轻微的生理异常以及神经认知障碍；而另一些患儿可能会出现比较严重的，甚至危及生命的症状。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术，其检测的范围比较广、可靠性较好、认可度较高，是染色体病检测的金标准，能够准确地检测出染色体的具体情况，主要包括染色体数目、染色体结构两个方面的异常。
随着传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术不断应用，操作人员逐渐发现这种方法耗时比较长、等待报告的时间需要10天左右，会加重孕妇以及孕妇家属焦虑的心情。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术运用效果并不理想，主要表现在两个方面。首先，传统的分析技术对操作人员的技术要求比较高。其次，孕妇的羊水对周围环境、显带比较敏感，会影响到检测的结果，甚至最终导致检测的失败[7]，会使患者错过最佳的医学处理时机。 随着科学技术的发展，QF-PCR检测技术得到了广泛的关注，适用于各个年龄阶段的产妇，这种方法能够进一步判断染色体的数目。QF-PCR检测技术与G显带的核型做比较，具有明显的优势[8]，其主要利用了STR的遗传标记在人群中多态性的特点，通过运用PCR扩增以及毛细管电泳技术，逐一分析各STR点荧光峰的个量或面积比值。涉及PentaD、D21S1246、D21S2052、D21S1446、D21S1411、LFG21、D21S1435、D21S1435、D21S11等定点，QF-PCR检测技术操作比较快速，最短能够在一天之内出结果，最长不会超过两天的时间，极大缩短了孕妇以及孕妇家属等待的时间，减少了不良情绪的发生；QF-PCR检测技术操作只需要很少的样本量就能够诊断单基因病；荧光定量聚合酶链反应（QF-PCR）检测技术操作比较便捷、自动化程度较高，能够根据STR点的个性化信息做出准确的判断，判断母体是否发生了组织污染[9-10]。在本研究500例样本中，主要使用了QF-PCR检测技术，分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。因此，QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中应用效果比较好，具有较高的准确性，发展前景广阔，值得在临床治疗中大力推广。QF-PCR检测技术在实际操作中比较高效，操作便捷、能够极大提高检测的效率，节省检测的时间，快速给出检测结果，在临床上能够与染色体核型分析优势互补。简单来说，QF-PCR检测技术所需要的样本比较少、操作步骤简单、自动化程度高、节省人力，过程比较快速、客观，是一种比较准确的检测方法。
参考文献
[1] 刘运华，李登峰，李庆丽，等.荧光定量PCR技术在胎儿染色体非整倍体快速诊断中的应用[J].广东医科大学学报，2020，38（6）：689-694.
[2] 潘宏贵，朱行美，梁萍，等.合并不同产前诊断指征的高龄孕妇胎儿染色体非整倍体发生风险的临床观察[J].中国实用医刊，2020，47（22）：6-8.
[3] 蓝志衡. DNA序列分布比率法在无创产前胎儿染色体非整倍体检测中的应用[D].广州：华南理工大学，2020.
[4] 马婧，刘东云，王雪燕，等.扩展性无创产前筛查在胎儿染色体非整倍体筛查中的临床应用[J].中国测试，2020，46（10）：86-92.
[5] 吴雪梅，罗奇智，杨联君，等.染色体非整倍体疾病性妊娠的多因素Logistic回归分析[J].系统医学，2020，5（16）：29-31.
[6] 代文成，张勇，余珍，等.BoBs技术：快速产前检测非整倍体和微缺失综合征的有效方法[J].国际检验医学杂志，2020，41（4）：443-445.
[8] 孙艳，王桂琪，杨文惠，等.罕见46，XY/47，XYY嵌合体型女性患者病因诊断的遗传咨询模式探讨[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2021，40（3）：189-192，201.
[9] 魏洁，阿不都热衣木·肉孜，余珍，等.新疆地区12874例外周血染色体核型回顾性分析[J].检验医学与临床，2021，18（8）：1116-1119.
[10] 魏友华，朱文娟，张延霞，等.高通量基因測序检测染色体拷贝数变异与染色体核型分析在产前诊断中联合应用的价值[J].中华医学遗传学杂志，2020，37（10）：1191-1193.
[11] 钟国兴，闫梅，陈剑虹，等.应用QF-PCR技术检测151例常见染色体非整倍体结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志，2019，27（2）：33-34.
【关键词】荧光定量聚合酶链反应技术；染色体非整倍体；产前诊断；核型分析
【中图分类号】R596.1.【文献标识码】A.【文章编号】2096-5249（2021）14-0147-02
染色体非整体倍体异常是一种比较常见的染色数目异常情况，包括21三体综合征、18三体综合征、13三体综合征、三倍体、性染色体数目异常，这些疾病将会胎儿的生命安全造成极大的隐患，如宫内死胎、流产等，患儿在出身后存在不同程度的智力缺陷、生长发育比较迟缓，甚至存在畸形组织器官，会给患者的家庭带来沉重的影响[1]。目前治疗染色体异常的方法还在探索阶段，临床上主要通过产前筛查染色体异常，进行产前干预，以提高新生儿的出生质量[2]。随着科学技术的发展，相关研究发现[3]，荧光定量聚合酶链反应（quantitative fluorescent polymerase chain reaction，QF-PCR）技术能够快速诊断染色体非整倍体，本研究选取2019年1月至2020 年 12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，并与传统的G显带染色体核型分析结果做对比，探究QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中的应用。
1？资料与方法
1.1.一般资料
选取2019年1月至2020年12月产前诊断500例标本中的13、18、21、X、Y染色体。按照常规培养、收获、制片G显带，按照相关标准进行核型分析。
1.2.方法
在B超引导下，对绒毛、羊水或者脐血穿刺取样，开展染色体核型分析与QF-PCR检测。染色体核型分析按照常规的细胞培养、收获、制片G显带，按照相关标准开展核型分析。QF-PCR检测主要分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。STR定点使用广州达瑞生物技术股份有限公司非整倍体检测试剂盒，共标测了20位点，包括21号染色体的6个STR位点，18号染色体的4个STR位点，13号染色体有4个STR位点，性染色体6个STR位点，包括按照相关标准提取绒毛、羊水或者脐血标本的DNA，在扩增仪上扩增，以95 ℃持续5 min预变性、然后用94 ℃30 s、60 ℃60 s、70 ℃60 s，循环25次左右，再以60 ℃延伸1 h，将扩增的产物放于4 ℃的环境中避光保存。取甲酰胺8.5 μL，分子质量标记物0.5 μL，PCR扩增产物1.0 μL，放在冰水上迅速冷却 3 min，进行毛细管电泳。
1.3.观察指标
重点观察500例标本中的13、18、21、X、Y染色体，尤其是DXS6809、DXS9895、AMEL、TAF9L、ZFXY、SRY、XHPRT；D13S256、D13S797、D13S317、D13S305、D13S800、D13S325位点的变化。
2？结果
在500例样本中，通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。
3？讨论
染色体数目发生异常或是结构发生畸形，是导致新生儿出现缺陷的主要原因，染色体异常的发生率通常在1/160，其中最为常见的为21、18、13三体、性染色体异常。患有染色体异常的患儿通常表现为智力低下、生长迟缓、畸形的症状[4]，会给患儿带来巨大的伤害。目前并没有效果较好的治疗方法，患儿的出生会给患儿的家庭以及患兒本身造成极大的伤害，患儿将承担巨大的疾病痛苦，而家庭需要承受沉重的经济负担。在诊断技术没有得到普及时，染色体异常患者由于发育比较迟缓，会伴随行为或者学习的障碍，在青春期容易出现发育异常，在成年以后易发生不孕不育，对患者本人来说是非常严重的影响，患者的家庭也承受着巨大的痛苦。
当前，各个地区大力提倡婚前、孕前检查，以及产前筛查、诊断，目的在于及早防控，以提高新生儿的质量[5]，稳定社会的和谐，避免悲剧的发生。相关的研究认为[6]，不同孕妇年龄与检出染色体异常之间存在联系，因此孕妇高龄被列为风险指标，其他风险因素还包括唐筛高风险、无创产前基因检测高风险、胎儿超声异常、夫妻双方患有珠蛋白生成障碍性贫血、不良生育史、染色体异常家族史等。每种综合征的表现并不相同，一些患儿可能只有轻微的生理异常以及神经认知障碍；而另一些患儿可能会出现比较严重的，甚至危及生命的症状。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术，其检测的范围比较广、可靠性较好、认可度较高，是染色体病检测的金标准，能够准确地检测出染色体的具体情况，主要包括染色体数目、染色体结构两个方面的异常。
随着传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术不断应用，操作人员逐渐发现这种方法耗时比较长、等待报告的时间需要10天左右，会加重孕妇以及孕妇家属焦虑的心情。传统的羊水细胞培养染色体核型分析技术运用效果并不理想，主要表现在两个方面。首先，传统的分析技术对操作人员的技术要求比较高。其次，孕妇的羊水对周围环境、显带比较敏感，会影响到检测的结果，甚至最终导致检测的失败[7]，会使患者错过最佳的医学处理时机。 随着科学技术的发展，QF-PCR检测技术得到了广泛的关注，适用于各个年龄阶段的产妇，这种方法能够进一步判断染色体的数目。QF-PCR检测技术与G显带的核型做比较，具有明显的优势[8]，其主要利用了STR的遗传标记在人群中多态性的特点，通过运用PCR扩增以及毛细管电泳技术，逐一分析各STR点荧光峰的个量或面积比值。涉及PentaD、D21S1246、D21S2052、D21S1446、D21S1411、LFG21、D21S1435、D21S1435、D21S11等定点，QF-PCR检测技术操作比较快速，最短能够在一天之内出结果，最长不会超过两天的时间，极大缩短了孕妇以及孕妇家属等待的时间，减少了不良情绪的发生；QF-PCR检测技术操作只需要很少的样本量就能够诊断单基因病；荧光定量聚合酶链反应（QF-PCR）检测技术操作比较便捷、自动化程度较高，能够根据STR点的个性化信息做出准确的判断，判断母体是否发生了组织污染[9-10]。在本研究500例样本中，主要使用了QF-PCR检测技术，分为STR定点、提取标本DNA、PCR扩增、毛细管电泳等。通过QF-PCR技术检测出非嵌合型染色体数目异常有60例，其中有21三体综合征25例，18三体综合征20例，13三体综合征5例，X单体3例，XXX1例，XXY2例，XYY2例，XXX合并18三体综合征2例，检测结果与核型分析结果一致。因此，QF-PCR技术在常见染色体非整倍体检测中应用效果比较好，具有较高的准确性，发展前景广阔，值得在临床治疗中大力推广。QF-PCR检测技术在实际操作中比较高效，操作便捷、能够极大提高检测的效率，节省检测的时间，快速给出检测结果，在临床上能够与染色体核型分析优势互补。简单来说，QF-PCR检测技术所需要的样本比较少、操作步骤简单、自动化程度高、节省人力，过程比较快速、客观，是一种比较准确的检测方法。
参考文献
[1] 刘运华，李登峰，李庆丽，等.荧光定量PCR技术在胎儿染色体非整倍体快速诊断中的应用[J].广东医科大学学报，2020，38（6）：689-694.
[2] 潘宏贵，朱行美，梁萍，等.合并不同产前诊断指征的高龄孕妇胎儿染色体非整倍体发生风险的临床观察[J].中国实用医刊，2020，47（22）：6-8.
[3] 蓝志衡. DNA序列分布比率法在无创产前胎儿染色体非整倍体检测中的应用[D].广州：华南理工大学，2020.
[4] 马婧，刘东云，王雪燕，等.扩展性无创产前筛查在胎儿染色体非整倍体筛查中的临床应用[J].中国测试，2020，46（10）：86-92.
[5] 吴雪梅，罗奇智，杨联君，等.染色体非整倍体疾病性妊娠的多因素Logistic回归分析[J].系统医学，2020，5（16）：29-31.
[6] 代文成，张勇，余珍，等.BoBs技术：快速产前检测非整倍体和微缺失综合征的有效方法[J].国际检验医学杂志，2020，41（4）：443-445.
[8] 孙艳，王桂琪，杨文惠，等.罕见46，XY/47，XYY嵌合体型女性患者病因诊断的遗传咨询模式探讨[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2021，40（3）：189-192，201.
[9] 魏洁，阿不都热衣木·肉孜，余珍，等.新疆地区12874例外周血染色体核型回顾性分析[J].检验医学与临床，2021，18（8）：1116-1119.
[10] 魏友华，朱文娟，张延霞，等.高通量基因測序检测染色体拷贝数变异与染色体核型分析在产前诊断中联合应用的价值[J].中华医学遗传学杂志，2020，37（10）：1191-1193.
[11] 钟国兴，闫梅，陈剑虹，等.应用QF-PCR技术检测151例常见染色体非整倍体结果分析[J]. 中国优生与遗传杂志，2019，27（2）：33-34.