【摘 要】
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目的 构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠.方法 使用Gateway cloning技术构建miR-31
【机 构】
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山西医科大学实验动物中心实验动物与人类疾病动物模型山西省重点实验室,太原 030001;
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目的 构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠.方法 使用Gateway cloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产.将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖.另取阳性小鼠,提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量.同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量.结果 成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上.各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达.阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠.结论 通过使用Gateway cloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31的表达稳定,神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠.
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