【摘 要】
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【目的】从一株具有细菌群体感应(Quorum Sensing,QS)信号分子淬灭活性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SS6中扩增N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine lactonase,Aii A
【机 构】
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中国科学院南海海洋研究所; 中国科学院大学; 中国水产科学研究院南海水产研究所农业部水产品加工重点实验室; 中山大学生命科学院生物防治国家重点实验室;
【基金项目】
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广东省教育部产学研结合项目(2011B090400151);(中国科学院南海水产研究所)农业部水产品加工重点实验室开放基金(NYJG201308)~~
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【目的】从一株具有细菌群体感应(Quorum Sensing,QS)信号分子淬灭活性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)SS6中扩增N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acylhomoserine lactonase,Aii A)基因aii ASS6并异源表达,研究此信号降解酶的酶学特性。【方法】设计特异性引物,从B.subtilis SS6中克隆N-酰基高丝氨酸内酯酶基因aii ASS6,测序并进行生物信息学分析;将此基因克隆到表达载体p ET28(a),构建重组菌株并提纯目的蛋白Aii ASS6;然后用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析目的蛋白Aii ASS6降解QS信号分子N-(3-Oxooctanoyl)-L-homoserine lactone(OOHL)的酶学特性。【结果】克隆得到基因片段,命名为aii ASS6(Gen Bank:KP125494),其编码一条含有297氨基酸残基的多肽,用p ET28(a)成功构建重组质粒p ET28-aii ASS6。生物信息学分析表明,Aii ASS6的氨基酸序列含有N-酰基高丝氨酸内酯酶典型的"HXHXDH"基序和194位的Tyr残基。在Escherichia coli BL21(DE3)中异源表达Aii ASS6,用Ni柱纯化后,Aii ASS6含量达2.76 mg/m L。HPLC检测结果表明Aii ASS6对OOHL具有很强的催化活性及耐热性,Km和Vmax分别为0.998 mmol/L和22.3 U/mg,最适pH为7.6,最适温度范围为50-90℃;此酶在4℃保存3个月后其残余活性仍达到86%,表现出较强的稳定性。【结论】从B.subtilis SS6中获得的QS淬灭酶Aii ASS6表现出降解QS信号分子的高活性,其酶学特性表明它具有作为微生物制剂防控植物或水产养殖中基于QS调控的病原菌毒力的应用潜力。
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