用λgt11载体构建人脑胶质瘤基因文库

来源 :苏州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kk62516337
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自人脑胶质瘤手术标本中提取mRNA,逆转录合成cDNA,在T_4DNA 连接酶作用下,与一头是平末端,另一头是EcoR I 粘性末端、内含Not I 切点的插头相连,经T_4多聚核苷酸激酶磷酸化后,再与脱磷酸处理过的λgt11 臂连接,形成重组λgt11DNA。体外包装,构建了一个库容量含1.02×10~6重组子的人脑胶质瘤cDNA 基因文库。克隆效率为1.08×10~7pfu/μg cDNA。重组百分比为96.2%。 MRNA was extracted from the surgical specimens of human glioma and cDNA was reverse transcribed. Under the action of T_4 DNA ligase, one end was blunt-ended and the other end was EcoR I-sticky end. After the phosphorylation of the polynucleotide kinase, it is ligated with the dephosphorylated λgt11 arm to form the recombinant λgt11 DNA. In vitro packaging, we constructed a human glioma cDNA library containing 1.02 × 10 ~ 6 recombinants. Clone efficiency of 1.08 × 10 ~ 7pfu / μg cDNA. The percentage of recombination was 96.2%.
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