【摘 要】
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目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-488对前列腺癌细胞株增殖及糖酵解能力的影响及其机制。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-488在前列腺癌细胞株的表达。生物信息学、双荧光素酶实验验证miR-488的靶点，转染miR-488模拟物24 h后，以25 μg蛋白行Western blot、Real-time PCR检测6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3
【机 构】
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518100 深圳，南方医科大学深圳医院健康管理中心,510630 广州，中山大学附属第三医院泌尿外科,518100 深圳，南方医科大学深圳医院泌尿外科,518100 深圳，南方医科大学深圳医院泌尿外
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目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-488对前列腺癌细胞株增殖及糖酵解能力的影响及其机制。
方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-488在前列腺癌细胞株的表达。生物信息学、双荧光素酶实验验证miR-488的靶点，转染miR-488模拟物24 h后，以25 μg蛋白行Western blot、Real-time PCR检测6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2同工酶3(PFKFB3)的表达。转染miR-488模拟物或同时转染过表达PFKFB3质粒24 h后，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测PC-3、DU145细胞增殖，通过糖摄取及乳酸分泌实验检测糖酵解能力。
结果与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较，miR-488在PC-3、DU145细胞中的表达水平分别为0.26±0.03(P＝0.031)、0.19±0.04(P＝0.021)，而在22RV1、LNCaP细胞中的表达差异无统计学意义。上调miR-488表达后，PC-3、DU145细胞的糖摄取率分别为对照组的0.54±0.03(P＝0.042)、0.52±0.01(P＝0.032)，乳酸分泌率分别为对照组的0.55±0.02(P＝0.037)、0.61±0.17(P＝0.048)，提示糖酵解能力明显下降，细胞增殖能力明显降低。生物信息学及双荧光素酶实验均表明PFKFB3是miR-488的靶点，上调miR-488表达后，PFKFB3 mRNA及蛋白表达均明显降低。同时上调miR-488与PFKFB3表达后，细胞的糖摄取分别为0.79±0.12、0.82±0.11，乳酸分泌分别为对照组的0.77±0.07(P＝0.015)、0.83±0.04(P＝0.026)，提示糖酵解能力升高。此外，细胞增殖能力也明显升高。
结论miR-488可通过下调靶蛋白PFKFB3的表达，从而调控前列腺癌细胞的增殖与糖酵解。
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