人内皮抑素在毕赤酵母中的组成型表达及其活性检测

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为获得大量具有生物学活性的重组人内皮抑素(Endostatin),在毕赤酵母中进行组成型表达的研究.将由毕赤酵母偏爱密码子组成的Endostatin cDNA插入组成型载体pGAPZαA中,构建表达载体pGAPZαA-ENDO,并转化到毕赤酵母X-33中.重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型表达Endostatin蛋白.重组人Endostatin产量达到102mg/L.Western blot显示:表达蛋白能与兔抗Endostatin的多克隆抗体特异性结合.纯化后的重组Endostatin具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞增殖的活性.利用毕赤酵母组成型表达系统能获得大量具有生物活性的Endostatin蛋白.
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