【摘 要】
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将A21位缺失胰岛素原基因直接克隆到温度诱导型表达载体 pBV220上,在E.coli系统中得到高效表达,表达量为8%-15%.表达产物经过超声波破碎或高压匀浆,包涵体裂解,等电点沉淀、
【机 构】
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山东农业大学动科院,西北农业大学动物科学与动物医学学院
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将A21位缺失胰岛素原基因直接克隆到温度诱导型表达载体 pBV220上,在E.coli系统中得到高效表达,表达量为8%-15%.表达产物经过超声波破碎或高压匀浆,包涵体裂解,等电点沉淀、二硫键还原及A,B链重组等后加工过程后,得到高纯度的突变胰岛素原.用酶切的方法将其活化为A21位缺失胰岛素,并进行性质和活性测定,证明其免疫活性和受体结合活性均大幅下降.因此认为A21Asn在维持胰岛素发挥其生物功能所必须的特定空间结构方面有重要作用,A21Asn是不可缺失的.
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