【摘 要】
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分别以长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)XST1的基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增其外切纤维素酶Ⅱ(cellobiohydrolase Ⅱ,CBHⅡ)的全长基因cbh Ⅱ.序列分析表明:cbh Ⅱ基
【机 构】
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福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福建,福州,350108
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分别以长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)XST1的基因组DNA和cDNA为模板PCR扩增其外切纤维素酶Ⅱ(cellobiohydrolase Ⅱ,CBHⅡ)的全长基因cbh Ⅱ.序列分析表明:cbh Ⅱ基因全长1583 bp,含3个内含子,分别为94～144 bp,529～584 bp和832～894 bp.该基因编码的外切纤维素酶Ⅱ蛋白全长470个氨基酸(其中前24个氨基酸为信号肽).将全长的cbhⅡ基因连接到pPIC3.5K上,转化毕赤酵母GS115(Pichia pastoris GS115).重组转化子96 h诱导培养.发酵上清液水解pNPC的酶活为18.1 U/L.SDS-PAGE检测结果表明:浓缩的重组转化子发酵液较对照菌株的发酵液中,有一明显加强的蛋白质条带,Mr约为67 k.
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