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目的
观察vaspin对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的影响及其潜在机制。
方法采用全骨髓法分离培养4周龄SD大鼠的BMSCs。成骨诱导液联合不同浓度vaspin(10、50、100 ng/ml)作用于BMSCs，分别于24、48、72 h采用CCK8法检测细胞增殖水平；于第7天用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测ALP、Runx2、β-catenin mRNA表达水平，Western印迹法检测β-catenin、Runx2蛋白表达水平。21天采用茜素红染色矿化结节及定量检测；在100 ng/ml vaspin中加入Wnt通路特异性阻断剂DKK1(1 μg/ml)后，RT-PCR及Western印迹法再次检测上述指标表达水平。
结果Vaspin对大鼠BMSCs增殖无显著影响(P>0.05)，可上调促进BMSCs成骨分化基因ALP、Runx2及β-catenin mRNA表达及β-catenin、Runx2蛋白表达，茜素红染色矿化结节呈红棕色且增多，定量检测OD值，vaspin组高于对照组(P<0.05)。加入阻断剂DKK1后ALP、Runx2及β-catenin mRNA表达水平均显著下降(均P<0.05)，Runx2及β-catenin蛋白表达水平亦显著下降。
结论Vaspin可通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化。