探讨高表达的微小RNA-130b-3p(MiR-130b-3p)参与肾脏损害的可能机制。
方法肾小管上皮细胞(HK-2)分别转染MiR-130b-3p模拟物(mimic)、对照mimic(NC mimic)，并给予10 μg/L TGF-β1刺激。实时定量PCR和Western印迹分别检测转染72 h后细胞Ⅳ型胶原蛋白(Collegen Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollegenⅠ)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平；生物信息学预测MiR-130b-3p潜在靶基因，Western印迹检测潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ蛋白表达水平；分别构建含ERBB2IP 3'端非编码区(3'-UTR)和PPARγ 3'-UTR的双荧光素酶报告基因载体，采用双荧光素酶报告基因方法检测靶基因荧光活性。
结果无刺激转染HK-2细胞后MiR-130b-3p mimic组与NC mimic组比较CollegenⅣ、α-SMA、CollegenⅠ、E-cadherin mRNA和蛋白表达差异均没有统计学意义(均P>0.05)。但在TGF-β1刺激后，与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组Collegen Ⅳ、α-SMA、CollegenⅠmRNA和蛋白表达水平均显著上调，E-cadherin的表达降低(均P<0.05)。与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组潜在靶基因ERBB2IP和PPARγ mRNA和蛋白表达水平均下调(均P<0.05)；双荧光素酶报告基因结果显示，与NC mimic组比较，MiR-130b-3p mimic组ERBB2IP荧光素酶活性降低(P<0.01)，而突变(mut)-MiR-130b-3p mimic组无明显变化(P>0.05)；与NC mimic+mut-PPARγ-3'UTR共转染组比较，MiR-130b-3p+mut-PPARγ-3'UTR组PPARγ荧光素酶活性降低，而PPARγ-3'UTR共转染MiR-130b-3p组PPARγ荧光素酶活性比mut-PPARγ-3'UTR共转染MiR-130b-3p组进一步降低，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
结论MiR-130b-3p通过直接抑制ERBB2IP和PPARγ的表达而促进肾小管上皮细胞上皮细胞-间充质细胞转分化作用，从而参与狼疮肾炎早期肾脏损害。