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摘要：目前已经发展的一些叶酸检测的方法各不相同，主要根据测定式样来决定其测定方法，最早发展的是微生物法，灵敏度高，但重复性相对较差，主要有比色法、紫外分光光度法、荧光分析法等等。
关键词：叶酸 检测 方法
微生物法
微生物法的检测原理为酪乳酸杆菌的生长必需叶酸，培养基中若缺乏叶酸则该细菌不能生长。在一定的条件下，酪乳酸杆菌的生长及其代谢产物的浓度与培养基中叶酸的含量成正比关系，可测定细菌代谢物或菌体的浓度，即用酸度或浑浊度测定试样中叶酸的含量。
荧光法
超声氧化荧光法
叶酸自身荧光很弱，在中性介质中经超声照射后，能被氧化成喋呤羧酸，其荧光强度在462 nm波长处比叶酸自身有显著提高。基于以上现象，建立了一种超声氧化预处理，荧光检测叶酸的方法。
荧光分光光度法
本法利用高锰酸钾在酸性介质中氧化叶酸为1-氨基-4-羟基喋吮-6-叶酸后，其荧光强度可以测定复方制剂中叶酸的含量，其他维生素可用硅藻土吸附除去，本法灵敏度较高，可测得0. l ug/ml的叶酸。
衍生荧光法
在酸性条件下，用强氧化剂氧化叶酸，并于254 nm紫外光下照射30 min，其氧化产物均具有强的荧光性质，因此荧光强度大大增强，比叶酸自身灵敏度提高2-3个数量级。实验结果表明：高锰酸钾氧化一光照体系检出限为3.2 x10 -9mol/L，过氧化氢氧化一光照体系检出限为6. 5 x 10 -9mol/L。
离子捕获法
1995年，wilson等提出了离子捕获法检测叶酸。即在实验中，样品中加入变性剂后，叶酸与内源性结合蛋白分离，释放后的叶酸再与带有大量阴离子的亲合试剂结合，合成产物经过离子捕获池而与阳离子纤维结合，最后通过碱性磷酸酶与喋酸（叶酸的类似物）结合物对叶酸结合蛋白上游离结合位点的探测，定量分析样品中叶酸的含量。
色谱法
高效液相色谱法
在薄膜强阴离子交换树脂 （0.01 *300cm pellicular）柱上用氯化钾一磷酸盐缓冲液（pH = 7.5）在40℃的温度下进行梯度洗脱，可将三经基叶酸（THF） ， N5-甲基一三经基叶酸（N5-CH3， -THF），去氢叶酸（DHF）、叶酸（FA）等异构体的混合物分离，洗脱的顺序是：THF， N5- CH3 -THF， DHF， FA。
薄层色谱法
采用过渡金属Mn2+ 、Fe2+ 、Co2+ 、Ni2+ 、Cu2+ 、Cd2+ 、Zn2+ 或Hg2+ 浸渍的硅胶G 薄层板，以正丙醇+正丁醇+水+氨（ 7+ 5+ 1+ 2） 为展开剂，可以对维生素B 1 、B 2 、B 6 、B 12 和蝶酰谷氨酸（ FA） 进行分离 。采用高效纤维素薄层板，以异丙醇和柠檬酸缓冲溶液为展开剂， 采用紫外和荧光检测， 可以测定亚叶酸钙制剂中0. 1%的FA、10-甲酰基二氢叶酸（ 10-CHO-DHF） 等杂质 。
气相色谱法
有人采用阿拉伯糖乳杆菌合成13C标记的叶酸，并以此为内标，与血液或组织样品混和，与过量的叶酸结合蛋白结合，除去对氨基苯甲酸多谷氨酸，然后用6mo1/ L HC1将叶酸分解成对氨基苯甲酸（PABA）、蝶陡和谷氨酸，采用气质联用技术测定PABA。
比色法
茚三酮比色法
本法主要适用于测定药剂中的叶酸，采用1， 2萘并喳琳-4磺酸钠将叶酸还原生成对氨基苯谷氨酸，在485nm处有最大吸收峰。现已改为用锌粉和盐酸将叶酸还原为2， 4， 5-三胺基-羟基嘧啶。经实验证明，TAHP中的5位胺基及6位羟基参加和茚三酮生色反应，该紫色化合物在555nm处有最大吸收峰。
还原裂解比色法
本法也适用于测定药物中叶酸的含量，其原理是基于将叶酸还原裂解为2-氨基-4-羟基-6-甲基喋啶和对氨基苯甲酰谷氨酸，后者经重氮化后与N-（1-N）-二乙二胺偶合形成紫红色的偶氮化合物，550nm波长处有最大吸收峰。
直接比色法
本法适用于测定纯品叶酸。原理为叶酸与Folin一cioalten试剂作用（室温，碱性介质中）产生蓝色，在760nm处有最大吸收峰。在4.4 – 44ug/ml浓度范围内符合Beer定律，颜色可稳定90min，叶酸的分解产物对氨基苯甲酞谷氨酸与F-C试剂产生蓝色。
紫外分光光度法
本法只适用于纯叶酸药剂及针剂的测定。测定原理为叶酸在0.1 mol/L氢氧化钠中具有最大吸收作用在260nm处和283nm处叶酸的最大吸收可用于定量分析叶酸含量。
电化学方法
利用叶酸分子在汞电极上的吸附性，采用在适当电位预富集的方法与示差脉冲结合，建立了测定痕量叶酸的電化学分析方法。
高效液相柱后衍生法
高效液相柱后衍生法的特点是操作简单、快捷、灵敏，满足日常分析。市疾病预防控制中心刘莉治等人采用该法测定出了婴儿保健食品中叶酸的含量，他们在实验中选用了含12%乙腈+88% 0.05 mmol/LKH2PO4溶液（pH=3.5）作为流动，使用荧光检测器检测定量，激发波长为365 nm，发射波长为450 nm，并用外标法测定了叶酸的含量。
单扫描示波极谱法
单扫描示波极谱法的特点是操作简单，不需要昂贵的仪器设备。集美大学的彭爱红等人 采用JP-303型极谱分析仪测定叶酸，建立了保健食品中叶酸的单扫描二阶导数示波极谱测定方法，并用正交试验确定了叶酸测定的最佳底液条件。
参考文献：
[1]方尚玲. 叶酸及其检测[J]. 武汉轻工大学学报， 2000（1）
关键词：叶酸 检测 方法
微生物法
微生物法的检测原理为酪乳酸杆菌的生长必需叶酸，培养基中若缺乏叶酸则该细菌不能生长。在一定的条件下，酪乳酸杆菌的生长及其代谢产物的浓度与培养基中叶酸的含量成正比关系，可测定细菌代谢物或菌体的浓度，即用酸度或浑浊度测定试样中叶酸的含量。
荧光法
超声氧化荧光法
叶酸自身荧光很弱，在中性介质中经超声照射后，能被氧化成喋呤羧酸，其荧光强度在462 nm波长处比叶酸自身有显著提高。基于以上现象，建立了一种超声氧化预处理，荧光检测叶酸的方法。
荧光分光光度法
本法利用高锰酸钾在酸性介质中氧化叶酸为1-氨基-4-羟基喋吮-6-叶酸后，其荧光强度可以测定复方制剂中叶酸的含量，其他维生素可用硅藻土吸附除去，本法灵敏度较高，可测得0. l ug/ml的叶酸。
衍生荧光法
在酸性条件下，用强氧化剂氧化叶酸，并于254 nm紫外光下照射30 min，其氧化产物均具有强的荧光性质，因此荧光强度大大增强，比叶酸自身灵敏度提高2-3个数量级。实验结果表明：高锰酸钾氧化一光照体系检出限为3.2 x10 -9mol/L，过氧化氢氧化一光照体系检出限为6. 5 x 10 -9mol/L。
离子捕获法
1995年，wilson等提出了离子捕获法检测叶酸。即在实验中，样品中加入变性剂后，叶酸与内源性结合蛋白分离，释放后的叶酸再与带有大量阴离子的亲合试剂结合，合成产物经过离子捕获池而与阳离子纤维结合，最后通过碱性磷酸酶与喋酸（叶酸的类似物）结合物对叶酸结合蛋白上游离结合位点的探测，定量分析样品中叶酸的含量。
色谱法
高效液相色谱法
在薄膜强阴离子交换树脂 （0.01 *300cm pellicular）柱上用氯化钾一磷酸盐缓冲液（pH = 7.5）在40℃的温度下进行梯度洗脱，可将三经基叶酸（THF） ， N5-甲基一三经基叶酸（N5-CH3， -THF），去氢叶酸（DHF）、叶酸（FA）等异构体的混合物分离，洗脱的顺序是：THF， N5- CH3 -THF， DHF， FA。
薄层色谱法
采用过渡金属Mn2+ 、Fe2+ 、Co2+ 、Ni2+ 、Cu2+ 、Cd2+ 、Zn2+ 或Hg2+ 浸渍的硅胶G 薄层板，以正丙醇+正丁醇+水+氨（ 7+ 5+ 1+ 2） 为展开剂，可以对维生素B 1 、B 2 、B 6 、B 12 和蝶酰谷氨酸（ FA） 进行分离 。采用高效纤维素薄层板，以异丙醇和柠檬酸缓冲溶液为展开剂， 采用紫外和荧光检测， 可以测定亚叶酸钙制剂中0. 1%的FA、10-甲酰基二氢叶酸（ 10-CHO-DHF） 等杂质 。
气相色谱法
有人采用阿拉伯糖乳杆菌合成13C标记的叶酸，并以此为内标，与血液或组织样品混和，与过量的叶酸结合蛋白结合，除去对氨基苯甲酸多谷氨酸，然后用6mo1/ L HC1将叶酸分解成对氨基苯甲酸（PABA）、蝶陡和谷氨酸，采用气质联用技术测定PABA。
比色法
茚三酮比色法
本法主要适用于测定药剂中的叶酸，采用1， 2萘并喳琳-4磺酸钠将叶酸还原生成对氨基苯谷氨酸，在485nm处有最大吸收峰。现已改为用锌粉和盐酸将叶酸还原为2， 4， 5-三胺基-羟基嘧啶。经实验证明，TAHP中的5位胺基及6位羟基参加和茚三酮生色反应，该紫色化合物在555nm处有最大吸收峰。
还原裂解比色法
本法也适用于测定药物中叶酸的含量，其原理是基于将叶酸还原裂解为2-氨基-4-羟基-6-甲基喋啶和对氨基苯甲酰谷氨酸，后者经重氮化后与N-（1-N）-二乙二胺偶合形成紫红色的偶氮化合物，550nm波长处有最大吸收峰。
直接比色法
本法适用于测定纯品叶酸。原理为叶酸与Folin一cioalten试剂作用（室温，碱性介质中）产生蓝色，在760nm处有最大吸收峰。在4.4 – 44ug/ml浓度范围内符合Beer定律，颜色可稳定90min，叶酸的分解产物对氨基苯甲酞谷氨酸与F-C试剂产生蓝色。
紫外分光光度法
本法只适用于纯叶酸药剂及针剂的测定。测定原理为叶酸在0.1 mol/L氢氧化钠中具有最大吸收作用在260nm处和283nm处叶酸的最大吸收可用于定量分析叶酸含量。
电化学方法
利用叶酸分子在汞电极上的吸附性，采用在适当电位预富集的方法与示差脉冲结合，建立了测定痕量叶酸的電化学分析方法。
高效液相柱后衍生法
高效液相柱后衍生法的特点是操作简单、快捷、灵敏，满足日常分析。市疾病预防控制中心刘莉治等人采用该法测定出了婴儿保健食品中叶酸的含量，他们在实验中选用了含12%乙腈+88% 0.05 mmol/LKH2PO4溶液（pH=3.5）作为流动，使用荧光检测器检测定量，激发波长为365 nm，发射波长为450 nm，并用外标法测定了叶酸的含量。
单扫描示波极谱法
单扫描示波极谱法的特点是操作简单，不需要昂贵的仪器设备。集美大学的彭爱红等人 采用JP-303型极谱分析仪测定叶酸，建立了保健食品中叶酸的单扫描二阶导数示波极谱测定方法，并用正交试验确定了叶酸测定的最佳底液条件。
参考文献：
[1]方尚玲. 叶酸及其检测[J]. 武汉轻工大学学报， 2000（1）