目的:建立甘肃不同产地一、二年生红芪和黄芪中黄酮类成分的指纹图谱,为科学评价甘肃红芪和黄芪的内在质量提供参考。并阐明红芪和黄芪能否替代使用的依据。方法:应用HPLC,测定甘肃一年生、二年生各28批红芪和28批黄芪黄酮类成分指纹图谱。色谱条件:Agilent ZROBAX-C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温35℃。结果:甘肃各产地一、二年生28批红芪有19个共有峰,28批黄芪有14个共有峰,一年生28批红芪和28批黄芪有9个共有峰,二年生28批红芪和28批黄芪有8个共有峰。甘肃各产地一年生红芪平均相似度为0.976,二年生红芪平均相似度为0.888;甘肃各产地一年生黄芪平均相似度为0.986,二年生黄芪平均相似度为0.911,一年生红芪和黄芪相似度为0.534,二年生红芪和黄芪相似度位0.490。结论:该方法重复性好,建立的指纹图谱为甘肃红芪和黄芪的质量控制及评价提供依据。随着药材生长年限的增加,甘肃红芪相似度降低,黄芪相似度降低,红芪和黄芪相似度降低。从红芪和黄芪黄酮类成分指纹图谱相似度来看,二者一年生和二年生的相似度均很低,差异较大,不适合替代使用。