[目的]研究显示人线粒体转录终止因子3(human mitochondrial transcription termination factor 3,h MTERF3)基因表达异常在肿瘤发生发展中具有重要意义。该研究旨在构建h MTERF3基因慢病毒表达载体,建立稳定过表达h MTERF3基因的人宫颈癌He La细胞株。[方法]采用RT-PCR技术从HEK293细胞中克隆出h MTERF3基因c DNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,使目的基因连接入载体质粒中,构建成重组慢病毒载体质粒。对重组慢病毒载体质粒进行PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序鉴定后,制备包装病毒病感染人宫颈癌He La细胞株,通过药物筛选及维持稳定过表达h MTERF3基因的He La细胞株。倒置荧光显微镜下观察转染后各组细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的表达情况,RT-q PCR检测转染后各组细胞中h MTERF3基因的表达水平。[结果]成功构建了含有h MTERF3基因c DNA ORF序列的载体质粒p Lenti6.3-h MTERF3-IRES2-EGFP,DNA测序结果完全正确,经慢病毒包装后所得病毒上清液的滴度为1.1×109TU/m L。稳转He La细胞株在荧光显微镜下可见GFP表达,RTq PCR实验证实稳定转染重组慢病毒后He La细胞中h MTERF3 mRNA水平比未转染细胞极显著增高(P<0.01)。[结论]成功构建了适用于h MTERF3基因研究的慢病毒表达系统,构建了稳定过表达h MTERF3基因的宫颈癌He La细胞株,从而为研究宫颈癌的基因诊治提供了一定的实验依据。