小鼠OB基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

来源 :厦门大学学报:自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shinetar
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利用RT—PCR技术从小鼠脂肪组织中扩增了OB基因,并利用定向克隆技术克隆至原核表达载体pTO—T7.将构建好的质粒导人表达型大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.并对表达产物进行Western-blot检测.表达产物利用亲和层析技术进行纯化.结果显示:表达的带有his标签的小鼠leptin融合蛋白,分子量约为20ku.0.5mmol/L的IPTG在37℃诱导2.5h时,leptin融合蛋白的表达量达到最大,达菌体总蛋白50%以上.表达产物经过纯化,纯度可达90%以上,Western-blot杂交
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