【摘 要】
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目的构建针对AFP基因的siRNA表达质粒,观察瞬时转染及稳定转染对RNAi抑制AFP基因表达的影响。方法构建针对AFP基因的siRNAs表达质粒,脂质体法分别瞬时转染与稳定转染肝癌细胞
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目的构建针对AFP基因的siRNA表达质粒,观察瞬时转染及稳定转染对RNAi抑制AFP基因表达的影响。方法构建针对AFP基因的siRNAs表达质粒,脂质体法分别瞬时转染与稳定转染肝癌细胞系EGHC-9901,western blot及RT-PCR检测靶基因与蛋白抑制效果,灰度分析比较两种转染方式对RNAi抑制AFP基因表达的影响。结果在稳定转染所得的单克隆细胞株中,AFP基因明显被抑制(P<0.05),western blot及RT-PCR灰度分析表明AFP蛋白和mRNA抑制率分别为84.3%与89.7%,而瞬时转染蛋白与mRNA抑制率分别为28.5%与34.2%。结论成功在体外建立稳定表达针对AFP基因的siRNA肝癌细胞系EGHC-9901,稳定转染所得的单克隆细胞株中,AFP蛋白与mRNA显著被抑制并且与mRNA抑制率大大高于瞬时转染。
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