【摘 要】
：
背景:一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体,可提高转染和表达效率.目的:利用多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin,MUC1)多肽骨架中含有许多连
论文部分内容阅读
背景:一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体,可提高转染和表达效率.目的:利用多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin,MUC1)多肽骨架中含有许多连续重复系列,构建人MUC1重复序列串联体基因与巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony sfimulating factor,GM-CSF)基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1(+).MUCI-GM-CSF,并观察重组质粒存COS-7细胞中的表达.设计、时间及地点:基因重组体设计实验,于2005-09/2006-12在解放军第四军医大学动物中心实验室完成.材料:真核表达载体pcDNA3.1(+)由英国Taylor-Papadimitriou 教授惠赠.pGEM.3zf(-)-GM-CSF质粒、COS-7细胞、pUC18载体及E.coli DH5 α为自备,雌性BALB/c小鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供.方法:将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片断经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF.以重组质粒转染COS-7细胞.主要观察指标:通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达.结果:酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒免疫小鼠可诱导产牛抗GM-CSF抗体.结论:成功构建了人MUC1基因重复序列串联体与免疫佐剂GM-CSF基因重组成为双基因多表位抗原的真核共表达质粒.
其他文献
背景:人工关节无菌性松动的力学因素是传统金属假体的弹性模量远远超过骨的弹性模量,组合后产生应力遮挡,引起骨吸收、骨萎缩.目的:体外测试自制的碳纤维增强聚醚醚酮(CF/PEE
各种不同字、词、句特点设计的近视力表及其相关研究成果颇丰,并在临床中得到一定的应用.但以汉字为视标的近视力表颇有争议,主要是因为汉字构架的多样性使其难以达到基本视
目的 探讨替米沙坦和血管紧张素Ⅱ对乳鼠胸主动脉平滑肌血管紧张素转化酶2表达的影响.方法 应用蛋白免疫印迹法检测血管紧张素转化酶2蛋白的表达,以逆转录聚合酶链反应法检测
P/TGMS (photo-thermo sensitive genic male sterility) lines with pale-green leaf color have beendeveloped in japonica rice. The marker trait is used as an assist
患者女,16岁.烦渴、多饮、多尿6个月余,加重1周.实验室检查:尿色淡,比重小于1.005,尿渗透压低于200 mmol/L,尿蛋白、尿糖及有形成分均为阴性.禁水试验 (+).加压素试验:尿渗透
目的 了解护理部主任的心理健康和应对方式状况及其相关性.方法 对湖南省84家医院的154名护理部主任选用症状自评量表(SCL-90)、简易应对方式量表进行调查及分析.结果 ①19.5
目的 探讨胃癌患者化疗期间自我管理教育的方法.方法 将60例胃癌化疗患者随机分为实验组和对照组各30例,2组均进行完整周期的化疗和一般的健康教育,实验组在此基础上实施自我
妊娠期TORCH感染代表以病毒及其他微生物引起的一组围产期感染性疾病.在我国20多年前进行血清筛查后,较为明确地认为,TORCH感染对胎、婴儿危害较大,同时已具有较成熟的诊断与
目的 探讨胰腺术后影响引流管留置时间的相关因素.方法 对217例胰腺术后病人临床资料进行回顾性分析,其中胰十二指肠切除术58例,胰体尾切除术77例,单纯胰腺肿物摘除术32例,慢
目的 比较血清氧化型低密度脂蛋白、高敏C反应蛋白水平在不同类型冠心病中的差异.方法 检测了82例冠心病患者(急性冠状动脉综合征42例、稳定型心绞痛20例和陈旧性心肌梗死20