构建铜绿假单胞菌重组（r）两歧双歧杆菌（Bb）疫苗，研究疫苗免疫后铜绿假单胞菌攻击小鼠的免疫保护力。
方法将PCR扩增的铜绿假单胞菌重组外膜蛋白H（OprH）基因克隆至载体pGEX-1λT，电穿孔转化两歧双歧杆菌，得到rBb-pGEX-OprH疫苗。将疫苗进行PCR鉴定，再以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，并行蛋白质免疫印迹（Western blot）鉴定。将21只BALB/c小鼠按照随机数字表法分为rBb-pGEX-OprH疫苗组（简称疫苗组）、空载体组和Bb对照组（每组7只），分别用rBb-pGEX-OprH、rBb-pGEX-1λT或Bb行灌胃免疫，每天1次，连续3 d，持续3周，于首次免疫后4周以5 × 107菌簇形成单位（CFU）铜绿假单胞菌滴鼻攻击，每天1次，连续3 d。攻击2周后处死小鼠，计数肺细菌负荷。另于免疫前、首次免疫后4周、攻击感染后2周取静脉血，酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定小鼠血清IgG水平。
结果PCR扩增出660 bp的OprH基因；PCR鉴定显示，rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功；SDS-PAGE证实，重组疫苗可表达相对分子质量为47 × 103的融合蛋白，与预期结果一致；Western blot结果显示，表达蛋白可被铜绿假单胞菌感染的小鼠血清识别。3组小鼠肺细菌菌落数比较差异有统计学意义（F = 1 506.793，P < 0.05），疫苗组肺细菌菌落数[（7.691 ± 0.069）lgCFU/g]低于空载体组[（8.855 ± 0.027）lgCFU/g]和Bb对照组[（8.958 ± 0.037）lgCFU/g，P均< 0.05]。疫苗免疫后4周，3组小鼠血清IgG水平比较差异有统计学意义（F = 77.216，P < 0.05），其中疫苗组血清IgG水平（0.078 ± 0.005）明显高于空载体组（0.054 ± 0.004）和Bb对照组（0.052 ± 0.004，P均< 0.05）。
结论铜绿假单胞菌rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功，且可诱导小鼠产生一定的保护力。