【摘 要】
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目的:探究转录因子TWIST对胶质瘤干细胞侵袭、迁移的影响,并探讨与微小RNA(microRNA,miR)-145之间的关系.方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象,提取干细胞并经免疫荧光染色CD133、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定.实验分组:对照组、过表达对照组、TWIST过表达组、沉默对照组、TWIST沉默组,分别用pcDNA3、pcDNA3-TWIST、pGPH1-shNC、pGP-TWIST-shRNA转染提取并鉴定后的干细胞
【机 构】
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河南大学淮河医院神经外科,河南 开封 475000
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目的:探究转录因子TWIST对胶质瘤干细胞侵袭、迁移的影响,并探讨与微小RNA(microRNA,miR)-145之间的关系.方法:以人神经胶质瘤细胞U251为研究对象,提取干细胞并经免疫荧光染色CD133、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定.实验分组:对照组、过表达对照组、TWIST过表达组、沉默对照组、TWIST沉默组,分别用pcDNA3、pcDNA3-TWIST、pGPH1-shNC、pGP-TWIST-shRNA转染提取并鉴定后的干细胞.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各细胞中TWIST mRNA和miR-145水平;蛋白质免疫印迹实验检测细胞中TWIST、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9蛋白水平;Transwell检测细胞侵袭和迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;双荧光素酶鉴定miR-145与TWIST的靶向关系.结果:干细胞分选与鉴定:CD133阳性干细胞约占5.6％左右;分选后细胞用CD133和GFAP染色显示双阳性.与对照组相比,TWIST过表达组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平升高(P<0.05),miR-145水平降低(P<0.05);TWIST沉默组细胞中TWIST mRNA和蛋白水平,细胞侵袭、迁移数量,愈合率,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P<0.05),miR-145水平升高(P0.05).miR-145与TWIST存在结合位点并经双荧光素酶靶向关系验证.结论:升高TWIST能够促进胶质瘤干细胞侵袭、迁移,且能靶向miR-145发挥作用.
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