论文部分内容阅读
目的建立气管内滴入核仁素shRNA表达载体的实验模型,观察其对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)活化的影响,探讨AM膜核仁素在LPS致大鼠ALI中的作用及机制。方法选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为A组(空白对照组),B组(ALI组),C组(转染重组质粒pBS-U6.C23shRNA并ALI组),D组(转染对照质粒pBS-U6.ControlshRNA并ALI组)。大鼠经尾静脉注射LPS以建立ALI模型,气管内滴入法转染重组质粒pBS-U6.C23shRNA表达载体,免疫印迹(Western blot)检测AM膜核仁素蛋白表达;核酸电泳迁移率实验(EMSA)检测AM中核因子(NF-κB)活性;酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)表达。结果转染pBS-U6.C23shRNA表达载体后可以显著下调AM膜核仁素蛋白表达;减轻肺病理损伤;降低NF-κB的活性以及肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的含量。与A组相比,B组及D组的大鼠AM膜核仁素蛋白表达显著增加,组间有统计学差异(P<0.01);C组大鼠AM膜核仁素蛋白表达明显下调,与B组相比,组间差异有统计学意义(P<0.01);而D组与B组中的大鼠AM膜核仁素蛋白表达组间没有统计学差异(P>0.05)。经LPS处理后,各组大鼠AM中NF-κB活性显著增加,与A组相比,组间差异非常明显(P<0.01)。C组大鼠AM中NF-κB活性明显降低,与B组比较,差异显著(P<0.05);而D组与B组比较,组间无明显差异(P>0.05)。经LPS诱导肺损伤后,显著增加了大鼠BALF中促炎因子TNF-α和IL-6的表达,各组和A组相比差异显著(P<0.01);C组大鼠BALF中TNF-α和IL-6的含量显著降低,与B组相比差异显著(P<0.01);而D组与B组相比,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论气管内滴入法可以安全有效转染核仁素shRNA表达载体,抑制AM活化,减轻肺损伤,AM膜核仁素参与了LPS致大鼠ALI的发病过程。