酒类酒球菌苹果酸—乳酸酶基因mleA的克隆

来源 :中国园艺学会葡萄与葡萄酒分会首届学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户：y871655121

【摘要】

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【作者】

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刘延琳蒋思欣何秀萍李华张博润

【机构】

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西北农林科技大学葡萄酒学院(杨凌) 中国科学院微生物研究所(北京)

【出处】

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中国园艺学会葡萄与葡萄酒分会首届学术年会

【发表日期】

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2004年7期

【关键词】

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酒类酒球菌苹果酸—乳酸酶基因克隆 GAATTC GGTACC

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苹果酸—乳酸酶是进行MLF的关键酶.该研究以酒类酒球菌31DH(Oenococcus oeni 31DH)的基因组DNA为模板进行其苹果酸—乳酸酶基因mleA的PCR扩增.PCR引物为5′-CGGAATTCATGACAGTC-CAGTAAGTAT-3′和5′-TAGGTACCACACTCTCAACACTCGTAAT-3′,引物的5′端分别引入EcoRI和KpnI酶切位点.得到的PCR产物约1.6kb.PCR产物回收后用EcoRI-KpnI双酶切,与经同样双酶切的质粒YEp352(大肠杆菌-酵母穿梭载体)进行连接并转化大肠杆菌感受态细胞,筛选重组质粒并用酶切及PCR验证.获得的酒类酒球菌苹果酸—乳酸酶基因的重组质粒命名为pLmleA.

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