【摘 要】
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天花粉胰蛋白酶抑制剂类似物((Ala-6)-TTI)基因克隆到载体pWR590-1进行表达.表达的融合蛋白,经部分纯化后用溴化氰裂解,裂解物还原后以固相胰蛋白酶作为介体进行二硫键重组,
【机 构】
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分子生物学国家重点实验室,分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生物化学研究所上海200031,中国科学院上海生物化学研究所上海200031
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天花粉胰蛋白酶抑制剂类似物((Ala-6)-TTI)基因克隆到载体pWR590-1进行表达.表达的融合蛋白,经部分纯化后用溴化氰裂解,裂解物还原后以固相胰蛋白酶作为介体进行二硫键重组,并用此固相酶亲和层析.纯化的(Ala-6)-TTI,其抑制活性与天然抑制剂相当,在HPLC C18柱上的峰形位置以及氨基酸组成分析结果与人工合成的(Ala-6)-TTI一致.上述基因通过点突变使其读框与酵母分泌型表达载体pVT102U/α相一致,然后进行克隆并转化酵母宿主菌S-78.培养物的上清液具有明显的胰蛋白酶抑制活性,
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