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目的 建立超高效液相色谱法测定人血浆中甲氨蝶呤浓度的方法学.方法 色谱柱:Waters UPLC BEH C18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm),柱温:30℃,流速:0.2 mL·min-1,流动相:甲醇-0.05 mol·L-1磷酸缓冲盐(pH=6.2)=17:83,检测波长:302 nm,内标:替硝唑.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性.结果 血浆中内源性杂质对样品测定无干扰,血浆中甲氨蝶呤在0.1～10μmol·L-1内线性关系良好(r2=0.999),定量限为0.10μmol·L-1,相对回收率为99.75％ ～103.01％,提取回收率为79.50～86.03％,日内、日间RSD均<6.00％,在室温放置12 h、冻融循环3次和-40℃冰冻30 d的稳定性良好.结论 本方法简便、准确、灵敏,适用于人体内甲氨蝶呤的浓度监测.