【摘 要】
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目的制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定。方法以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室,
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目的制备抗人L型丙酮酸激酶N末端(PK-N)的单克隆抗体并对其特异性进行鉴定。方法以PK-N-GST-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此单克隆抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗PK-N单克隆抗体的细胞株,亚类鉴定重链为IgG2b,轻链为kappa链。ELISA法测定腹水效价分别为1∶409600和1∶102400,抗体相对亲和力分别为3.54×108L/mol和2.72×108L/mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原和人肝细胞株HL-7702中的天然丙酮酸激酶蛋白。免疫组化进一步显示了其在细胞及组织中的定位,均匀的分布于细胞的胞浆中。结论成功制备了抗PK-N单克隆抗体。
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