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摘要[目的]建立鹿茸珍葛胶囊质量标准，为该保健食品的质量控制提供理论依据。[方法]采用分光光度法，根据GB5009系列国家标准方法及《中国药典》，对该保健食品的功效成分和理化指标进行测定，建立质量控制标准。[结果]功效成分检测：总黄酮≥22.6 g/kg，钙≥173.5 g/kg，蛋白质≥53.4 g/kg；理化指标检测：水分≤9.0%，灰分≤60%，崩解时限≤60 min。[结论]该方法操作简便，准确度高，重现性好，可作为该产品质量标准的制定依据。
关键词鹿茸珍葛胶囊；质量标准；功效成分；理化指标
中图分类号R944.5文献标识码A文章编号0517-6611（2016）16-117-02
Abstract[Objective] To establish the quality standard of Lurongzhenge Capsule， and to provide experimental basis for the quality control of healthy food. [Method] The spectrophotometry， GB5009 series of national standard and Chinese Pharmacopoeia were used to detect the functional component and physical and chemical index of healthy food. The quality control standard was established. [Result] Detection results of functional component were as follows： total flavonoids ≥ 22.6 g/kg， calcium ≥ 173.5 g/kg， and protein≥ 53.4 g/kg. Detection results of physical and chemical indexes were as follows： moisture≤ 9.0%， ash content ≤60%， and disintegration time ≤ 60 min. [Conclusion] This method is reliable， accurate， reproducible and feasible， and is suitable for the quality control of Lurongzhenge Capsules.
Key wordsLurongzhenge capsules； Quality standard；Functional component；Physicochemical index
骨质疏松症是指骨骼中单位体积内骨量减少、骨组织显微结构异常、骨脆性增加、容易发生骨折的一种疾病[1]。我国目前已进入老龄化社会，且人口众多，全世界老年人发病率已超过25%[2]，骨质疏松症已成为我国重要的公共卫生问题之一。骨密度（BMD）是反映骨质疏松程度的重要指标，是预测骨折危险性的重要依据。影响骨密度的因素很多，如年龄、性别、遗传、饮食营养和地域等。目前，由于医学上尚未完全根治骨质疏松症的方法，大部分都是通过增加骨密度来预防或治疗骨质疏松症。
鹿茸珍葛胶囊由梅花鹿茸、珍珠粉、葛根、补骨脂等主要原料精制而成。此方以中医理论的补肾、疏肝、补脾为主，辅助西医理论的补钙和雌激素为辅，精选保健食品原料经科学配比精制而成。经动物试验证明，其具有增加骨密度、防治骨质疏松症的保健功能。笔者对其质量标准进行研究，以期为该产品企业标准制定提供科学依据。
1材料与方法
1.1仪器Ultra-6100紫外分光光度计（北京普源精电科技有限公司），ICE 3500型原子吸收分光光度计（美国戴安），ETHOS A型微波消解仪（意大利Milestone公司），HH-S114型恒温水浴锅（金坛市华龙实验仪器厂），DZF-6051型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），SX-5-1型马弗炉（天津市泰斯特仪器有限公司），ZB-1E型智能崩解仪（天津市天大天发科技有限公司）。
1.2试药芦丁对照品购于中国食品药品检定研究所；钙标准液、砷标准液、铅标准液、汞标准液均购于国家有色金属及电子材料分析测试中心；甲醇、乙醇及其他试剂均为分析纯，购于北京化工厂；鹿茸珍葛胶囊（自制，批号：20150724、20150725、20150726）。
1.3方法
1.3.1功效成分测定。
1.3.1.1总黄酮[3]。①供试品溶液制备：精密称定样品6 g，加70%乙醇100 mL，80 ℃水浴回流2 h，提取液50 ℃下减压蒸馏，直至烧瓶内无醇味。用75 mL氯仿分3次萃取，收集下层水溶液浓缩并定容至50 mL，待用。②树脂纯化：称取2 g经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱。取供试品水溶液2 mL，缓慢滴入层析柱中，待液体被充分吸附后，用甲醇洗脱至流出液基本无色，洗脱流速1.0 mL/min，收集洗脱液浓缩，用甲醇定容至10 mL。③标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液（150 μg/mL）0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL置于10 mL比色管中，加30%乙醇5 mL，5%亚硝酸钠0.3 mL，振摇，室温静置5 min；加10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，室温放置60 min；加1.0 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，以零管为空白，在510 nm处测定吸光度A，以浓度C为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。④样品测定：取2 mL待测液，其余操作方法同标准曲线的绘制。 1.3.1.2钙。①供试品、标准溶液制备：参考GB/T 5009.92[4]。②测定方法：将消化好的试样液、试剂空白液和钙元素的标准浓度系列分别导人火焰进行测定，具体测定参数：波长422.7 nm，光源为可见光，火焰为空气-乙炔，标准系列浓度为0.3～0.5 mg/mL，稀释溶液为20 g/L氯化镧溶液。
1.3.1.3蛋白质。①样品处理：参照GB 5009.5[5]，同时做试剂空白试验。②测定方法：固定定氮蒸馏装置，加入几滴硫酸使水保持酸性，加热至沸腾。向接收瓶内加入10.0 mL硼酸溶液及1～2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下。准确吸取2.0 mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10 mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将10.0 mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并水封。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏10 min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1 min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。以硫酸标准滴定溶液滴定至终点，终点颜色为灰蓝色，同时做试剂空白。
1.3.2理化指标测定。①水分：参照GB 5009.3[6]。②灰分[7]：参照GB 5009.4。③崩解时限[8]：参照《中国药典》2015版第4部。
2结果与分析
2.1功效成分
2.1.1总黄酮含量。标准曲线：回归方程y=0.001 2x+0.001 5，R2=0.999 5。结果表明，芦丁在75～600 μg线性关系良好（图1）。3批鹿茸珍葛胶囊样品中总黄酮含量见表1。由表1可知，其平均值为28.3 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%为下限作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊总黄酮含量不得低于22.6 g/kg。
图1芦丁标准曲线
Fig.1Standard curve of rutin2.1.2钙含量。3批鹿茸珍葛胶囊样品中钙含量见表1。由表1可知，其平均值为216.9 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%为下限作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊钙含量不得低于173.5 g/kg。
2.1.3蛋白质含量。3批鹿茸珍葛胶囊样品中蛋白质含量见表1。由表1可知，其平均值为66.7 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊样品中蛋白质含量不得低于53.4 g/kg。
2.2理化指标
2.2.1水分含量。由表2可知，3批样品水分含量平均值为3.22%，均小于9.0%，符合胶囊剂水分的要求。
2.2.2灰分。由表2可知，3批样品灰分含量平均值为47.80%。考虑原料产地以及检测等误差，该产品灰分按3批样品的平均值增加20%作为灰分的上限值，即灰分不得高于60%。
2.2.3崩解时限。由表2可知，3批样品崩解时限平均值为21.67 min，均小于60 min，符合胶囊剂崩解时限规定。
3结论
鹿茸珍葛胶囊以中医补肾补骨生髓为主，结合西医补钙和雌激素为辅。该研究结果表明，总黄酮≥22.6 g/kg，钙≥173.5 g/kg，蛋白质≥53.4 g/kg。为更好地控制产品质量，该研究检测了产品中水分、灰分、崩解时限等指标。结果表明，水分和崩解时限均能满足胶囊制剂的要求，因产品中含珍珠粉等天然钙源，导致理化指标中灰分含量较高，但不影响产品质量和疗效。
该研究所用方法操作简单、准确度高、重现性好，能够对该产品的质量进行有效控制。下一步将对该产品的微生物和重金属进行检测，完善该产品的质量控制标准，为产品质量标准的制定提供科学依据。
参考文献
[1] 刘忠厚.骨质疏松学[M].北京：科学出版社，1998：226.
[2] 黄火强.骨质疏松症发病机理及临床药物治疗[J].标记免疫分析与临床，2010，17（3）：205-207.
[3] 白鸿.保健食品功效成分检测方法[M].北京：中国中医药出版社，2011：122-124.
[4] 中华人民共和国卫生部.食品中钙的测定： GB/T 5009.92—2003[S].北京：中国标准出版社，2004.
[5] 中华人民共和国卫生部.食品中蛋白质的测定： GB 5009.5—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[6] 中华人民共和国卫生部.食品中水分的测定： GB 5009.3—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[7] 中华人民共和国卫生部.食品中灰分的测定： GB 5009.4—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015： 6-7.
关键词鹿茸珍葛胶囊；质量标准；功效成分；理化指标
中图分类号R944.5文献标识码A文章编号0517-6611（2016）16-117-02
Abstract[Objective] To establish the quality standard of Lurongzhenge Capsule， and to provide experimental basis for the quality control of healthy food. [Method] The spectrophotometry， GB5009 series of national standard and Chinese Pharmacopoeia were used to detect the functional component and physical and chemical index of healthy food. The quality control standard was established. [Result] Detection results of functional component were as follows： total flavonoids ≥ 22.6 g/kg， calcium ≥ 173.5 g/kg， and protein≥ 53.4 g/kg. Detection results of physical and chemical indexes were as follows： moisture≤ 9.0%， ash content ≤60%， and disintegration time ≤ 60 min. [Conclusion] This method is reliable， accurate， reproducible and feasible， and is suitable for the quality control of Lurongzhenge Capsules.
Key wordsLurongzhenge capsules； Quality standard；Functional component；Physicochemical index
骨质疏松症是指骨骼中单位体积内骨量减少、骨组织显微结构异常、骨脆性增加、容易发生骨折的一种疾病[1]。我国目前已进入老龄化社会，且人口众多，全世界老年人发病率已超过25%[2]，骨质疏松症已成为我国重要的公共卫生问题之一。骨密度（BMD）是反映骨质疏松程度的重要指标，是预测骨折危险性的重要依据。影响骨密度的因素很多，如年龄、性别、遗传、饮食营养和地域等。目前，由于医学上尚未完全根治骨质疏松症的方法，大部分都是通过增加骨密度来预防或治疗骨质疏松症。
鹿茸珍葛胶囊由梅花鹿茸、珍珠粉、葛根、补骨脂等主要原料精制而成。此方以中医理论的补肾、疏肝、补脾为主，辅助西医理论的补钙和雌激素为辅，精选保健食品原料经科学配比精制而成。经动物试验证明，其具有增加骨密度、防治骨质疏松症的保健功能。笔者对其质量标准进行研究，以期为该产品企业标准制定提供科学依据。
1材料与方法
1.1仪器Ultra-6100紫外分光光度计（北京普源精电科技有限公司），ICE 3500型原子吸收分光光度计（美国戴安），ETHOS A型微波消解仪（意大利Milestone公司），HH-S114型恒温水浴锅（金坛市华龙实验仪器厂），DZF-6051型真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），SX-5-1型马弗炉（天津市泰斯特仪器有限公司），ZB-1E型智能崩解仪（天津市天大天发科技有限公司）。
1.2试药芦丁对照品购于中国食品药品检定研究所；钙标准液、砷标准液、铅标准液、汞标准液均购于国家有色金属及电子材料分析测试中心；甲醇、乙醇及其他试剂均为分析纯，购于北京化工厂；鹿茸珍葛胶囊（自制，批号：20150724、20150725、20150726）。
1.3方法
1.3.1功效成分测定。
1.3.1.1总黄酮[3]。①供试品溶液制备：精密称定样品6 g，加70%乙醇100 mL，80 ℃水浴回流2 h，提取液50 ℃下减压蒸馏，直至烧瓶内无醇味。用75 mL氯仿分3次萃取，收集下层水溶液浓缩并定容至50 mL，待用。②树脂纯化：称取2 g经预处理的聚酰胺树脂粉末，湿法装柱。取供试品水溶液2 mL，缓慢滴入层析柱中，待液体被充分吸附后，用甲醇洗脱至流出液基本无色，洗脱流速1.0 mL/min，收集洗脱液浓缩，用甲醇定容至10 mL。③标准曲线的绘制：准确吸取芦丁标准溶液（150 μg/mL）0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL置于10 mL比色管中，加30%乙醇5 mL，5%亚硝酸钠0.3 mL，振摇，室温静置5 min；加10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，室温放置60 min；加1.0 mol/L氢氧化钠溶液2 mL，用30%乙醇定容至刻度，以零管为空白，在510 nm处测定吸光度A，以浓度C为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。④样品测定：取2 mL待测液，其余操作方法同标准曲线的绘制。 1.3.1.2钙。①供试品、标准溶液制备：参考GB/T 5009.92[4]。②测定方法：将消化好的试样液、试剂空白液和钙元素的标准浓度系列分别导人火焰进行测定，具体测定参数：波长422.7 nm，光源为可见光，火焰为空气-乙炔，标准系列浓度为0.3～0.5 mg/mL，稀释溶液为20 g/L氯化镧溶液。
1.3.1.3蛋白质。①样品处理：参照GB 5009.5[5]，同时做试剂空白试验。②测定方法：固定定氮蒸馏装置，加入几滴硫酸使水保持酸性，加热至沸腾。向接收瓶内加入10.0 mL硼酸溶液及1～2滴混合指示液，并使冷凝管的下端插入液面下。准确吸取2.0 mL试样处理液由小玻杯注入反应室，以10 mL水洗涤小玻杯并使之流入反应室内，随后塞紧棒状玻塞。将10.0 mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并水封。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸馏10 min后移动蒸馏液接收瓶，液面离开冷凝管下端，再蒸馏1 min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下蒸馏液接收瓶。以硫酸标准滴定溶液滴定至终点，终点颜色为灰蓝色，同时做试剂空白。
1.3.2理化指标测定。①水分：参照GB 5009.3[6]。②灰分[7]：参照GB 5009.4。③崩解时限[8]：参照《中国药典》2015版第4部。
2结果与分析
2.1功效成分
2.1.1总黄酮含量。标准曲线：回归方程y=0.001 2x+0.001 5，R2=0.999 5。结果表明，芦丁在75～600 μg线性关系良好（图1）。3批鹿茸珍葛胶囊样品中总黄酮含量见表1。由表1可知，其平均值为28.3 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%为下限作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊总黄酮含量不得低于22.6 g/kg。
图1芦丁标准曲线
Fig.1Standard curve of rutin2.1.2钙含量。3批鹿茸珍葛胶囊样品中钙含量见表1。由表1可知，其平均值为216.9 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%为下限作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊钙含量不得低于173.5 g/kg。
2.1.3蛋白质含量。3批鹿茸珍葛胶囊样品中蛋白质含量见表1。由表1可知，其平均值为66.7 g/kg。考虑生产、检测等误差，以其平均值的80%作为最低检出限，确定鹿茸珍葛胶囊样品中蛋白质含量不得低于53.4 g/kg。
2.2理化指标
2.2.1水分含量。由表2可知，3批样品水分含量平均值为3.22%，均小于9.0%，符合胶囊剂水分的要求。
2.2.2灰分。由表2可知，3批样品灰分含量平均值为47.80%。考虑原料产地以及检测等误差，该产品灰分按3批样品的平均值增加20%作为灰分的上限值，即灰分不得高于60%。
2.2.3崩解时限。由表2可知，3批样品崩解时限平均值为21.67 min，均小于60 min，符合胶囊剂崩解时限规定。
3结论
鹿茸珍葛胶囊以中医补肾补骨生髓为主，结合西医补钙和雌激素为辅。该研究结果表明，总黄酮≥22.6 g/kg，钙≥173.5 g/kg，蛋白质≥53.4 g/kg。为更好地控制产品质量，该研究检测了产品中水分、灰分、崩解时限等指标。结果表明，水分和崩解时限均能满足胶囊制剂的要求，因产品中含珍珠粉等天然钙源，导致理化指标中灰分含量较高，但不影响产品质量和疗效。
该研究所用方法操作简单、准确度高、重现性好，能够对该产品的质量进行有效控制。下一步将对该产品的微生物和重金属进行检测，完善该产品的质量控制标准，为产品质量标准的制定提供科学依据。
参考文献
[1] 刘忠厚.骨质疏松学[M].北京：科学出版社，1998：226.
[2] 黄火强.骨质疏松症发病机理及临床药物治疗[J].标记免疫分析与临床，2010，17（3）：205-207.
[3] 白鸿.保健食品功效成分检测方法[M].北京：中国中医药出版社，2011：122-124.
[4] 中华人民共和国卫生部.食品中钙的测定： GB/T 5009.92—2003[S].北京：中国标准出版社，2004.
[5] 中华人民共和国卫生部.食品中蛋白质的测定： GB 5009.5—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[6] 中华人民共和国卫生部.食品中水分的测定： GB 5009.3—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[7] 中华人民共和国卫生部.食品中灰分的测定： GB 5009.4—2010[S].北京：中国标准出版社，2010.
[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015： 6-7.