【摘 要】
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目的 构建硫酸铍(BeSO4)致人肺腺癌A549细胞纤维化模型并验证转化生长因子-β1(TGF-β1)及其他纤维化相关因子的变化.方法 取对数生长期的A549细胞,采用CCK-8法检测染毒不同浓度(0、1、10、50、100、150 μmol·L-1)、不同时间(24、48、72 h)对细胞存活率的影响,确定后续实验染毒浓度与染毒时间.于倒置显微镜下分别观察细胞形态,并采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(
【机 构】
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宁夏医科大学公共卫生与管理学院,银川 750004;宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室,银川 750004
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目的 构建硫酸铍(BeSO4)致人肺腺癌A549细胞纤维化模型并验证转化生长因子-β1(TGF-β1)及其他纤维化相关因子的变化.方法 取对数生长期的A549细胞,采用CCK-8法检测染毒不同浓度(0、1、10、50、100、150 μmol·L-1)、不同时间(24、48、72 h)对细胞存活率的影响,确定后续实验染毒浓度与染毒时间.于倒置显微镜下分别观察细胞形态,并采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白(COL-Ⅰ)和Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅲ)相对表达水平.结果 随着BeSO4浓度增加,A549细胞活力呈下降趋势(P均＜0.05),且呈时间和剂量依赖性,确定BeSO4的染毒浓度为1、10、100 μmol·L-1(溶剂为完全培养基,设为低、中、高剂量组)为后续实验浓度,染毒时间为48 h.BeSO4刺激A549细胞后,细胞形态发生改变,呈长纤维状.不同剂量BeSO4处理A549细胞48 h后α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量均呈升高趋势.与空白对照组相比,低剂量组α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量分别增长了 0.23、0.38、0.26和0.48倍,中剂量组α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量分别增长了 0.40、0.93、0.42和0.95倍,高剂量组α-SMA、TGF-β1、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ的蛋白相对表达量分别增长了 0.69、1.24、0.62和1.31倍(P均＜0.05).结论 BeSO4致A549细胞纤维化模型构建成功,可为后续实验提供基础.
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