【摘 要】
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目的 体外培养脑白质胶质源性神经祖细胞并制备神经祖细胞的缺血模型,以期进一步研究脑白质缺血性损伤时脑白质的再生机制. 方法 分离3日龄内SD新生大鼠的双侧脑室周围白质组
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目的 体外培养脑白质胶质源性神经祖细胞并制备神经祖细胞的缺血模型,以期进一步研究脑白质缺血性损伤时脑白质的再生机制. 方法 分离3日龄内SD新生大鼠的双侧脑室周围白质组织,原代培养脑白质神经祖细胞,每3～4天传代一次,并对神经祖细胞进行诱导分化培养.免疫细胞化学法分别鉴定原代和传代培养的神经球标志物神经胶质抗原2(NG2)和诱导分化后少突胶质细胞前体标志物O4的表达.应用自行研制的细胞缺氧箱,对传至第3～4代的神经祖细胞制备氧糖剥夺缺血性模型.建模后24 h应用Hoechst 33342/PI双染和CCK-8法分别评估氧糖剥夺30 min、45 min、60 min、2h及3h神经祖细胞存活率的变化. 结果 脑白质神经祖细胞具有形成神经球和连续传代的能力,原代和传代培养的神经球均显示NG2阳性,并可被诱导分化为O4阳性的少突胶质细胞前体.正常培养的神经祖细胞无凋亡和坏死细胞,随着氧糖剥夺时间的逐步延长,凋亡细胞逐渐增多并出现坏死细胞.不同氧糖剥夺时间组细胞存活率均不同,而且随着氧糖剥夺时间的延长,细胞存活率下降,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 成功培养了脑白质胶质源性神经祖细胞并建立了有效可靠的祖细胞氧糖剥夺模型,为进一步研究脑白质缺血性损伤时脑白质的神经再生机制奠定了基础.
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