【摘 要】
：
目的:探讨半夏泻心汤对胃癌来源外泌体(Exo)诱发人腹膜间皮细胞(HMrSV5)上皮间质转化(EMT)的影响.方法:制备半夏泻心汤含药血清,提取人胃癌NCI-N87细胞外泌体(NCI-N87-Exo),采用透射电镜及蛋白免疫印迹法(Western blot)进行鉴定,并用细胞膜红色荧光探针(Dil)标记.实验分为空白组、模型组、半夏泻心汤低、中、高剂量组(13.5,27,54 g·kg-1).空白组将HMrSV5细胞单独培养;模型组在HMrSV5中加入的NCI-N87-Exo(100 mg·L-1);半夏
论文部分内容阅读
目的:探讨半夏泻心汤对胃癌来源外泌体(Exo)诱发人腹膜间皮细胞(HMrSV5)上皮间质转化(EMT)的影响.方法:制备半夏泻心汤含药血清,提取人胃癌NCI-N87细胞外泌体(NCI-N87-Exo),采用透射电镜及蛋白免疫印迹法(Western blot)进行鉴定,并用细胞膜红色荧光探针(Dil)标记.实验分为空白组、模型组、半夏泻心汤低、中、高剂量组(13.5,27,54 g·kg-1).空白组将HMrSV5细胞单独培养;模型组在HMrSV5中加入的NCI-N87-Exo(100 mg·L-1);半夏泻心汤低、中、高剂量组在模型组的基础上分别加入10％的半夏泻心汤低、中、高剂量含药血清.激光共聚焦显微镜观察24,48,72 h时HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取情况,72 h后观察HMrSV5细胞形态学的变化,Western blot检测HMrSV5细胞中E-钙黏附蛋白(E-cadherin),细胞角蛋白19(CK19),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和弹性蛋白(Elastin)及转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2/3,磷酸化(p)-Smad2/3蛋白表达.结果:透射电镜观察到NCI-N87-Exo呈椭圆或碟状的囊泡结构,粒径介于40～80 nm,高表达Exo标志蛋白CD9,CD63,不表达钙网蛋白(Calreticulin),证实为NCI-N87-Exo.共培养24,48,72 h后,荧显微镜下均可观察到NCI-N87-Exo被HMrSV5细胞摄取,与时间呈正相关.与空白组比较,半夏泻心汤可显著抑制HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取,以半夏泻心汤中、高剂量组含药血清最为明显(P＜0.05,P＜0.01).半夏泻心汤含药血清干预后HMrSV5细胞排列较为紧密,细胞间隙明显缩小,以半夏泻心汤含药血清大剂量组最为明显.Western blot显示,与模型组比较,半夏泻心汤中、高剂量组含药血清干预后HMrSV5细胞E-cadherin,CK19蛋白表达显著升高(P＜0.01),α-SMA,Elastin蛋白表达显著降低(P＜0.01),半夏泻心汤低、中、高剂量组TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),Smad2/3无明显变化.结论:NCI-N87-Exo能够被HMrSV5细胞摄取并诱发HMrSV5细胞EMT,半夏泻心汤能够阻抑HMrSV5细胞对NCI-N87-Exo的摄取,抑制NCI-N87-Exo诱发的HMrSV5细胞EMT,其作用机制与调控TGF-β1/Smads信号通路有关.
其他文献
目的:基于“心受气于脾”探讨心痛泰调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/转录激活因子-1(AP-1)对动脉粥样硬化兔的中医证候积分和血管平滑肌细胞(VSMC)胶原纤维的影响.方法:120只清洁级兔随机分为假手术组,痰瘀互结模型组,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组.采用高脂喂养+球囊损伤法,造成痰瘀互结病证结合动脉粥样硬化兔模型,造模后予以相应药物灌胃8周(心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的给药量分别为2.3,4.6,9.2 g·kg-1和0.55 mg·kg-1).给药周期
目的:探讨加味升降散对膜性肾病(MN)大鼠血清缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制.方法:采用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)尾静脉注射方法复制MN模型,将成功造模的大鼠随机分为模型组,加昧升降散组和贝那普利组.各组根据相应的药物剂量灌胃(ig),每日1次.在给药的第4周末检测相关指标,检测24 h尿蛋白(UTP),尿素氮(BUN),肌酐(SCr)的变化情况,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)
目的:从抑制癌细胞缺氧诱导因子(HIF)信号通路中核转录因子-κB(NF-κB),HIF-1α及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的角度探讨川芎嗪和大黄素合用抑制腹水癌细胞新生血管的作用.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄素组、川芎嗪+大黄素组,各实验组采用原位注射法对正常大鼠肝脏注射大鼠腹水癌细胞(Walker-256细胞),假手术组注射同等体积生理盐水,并分组灌胃给药川芎嗪(10 mg·kg-1),大黄素(10 mg·kg-1),川芎嗪+大黄素(川芎嗪10 mg·kg-1+
目的:观察健脾补肺方对卵蛋白(OVA)致敏并攻击复制的幼龄哮喘大鼠模型气道炎症、高反应性及环磷酸腺苷(cAMP)信号通路活性的影响.方法:雄性SD大鼠75只,随机选取15只作为正常组,剩余大鼠随机分为哮喘模型组,健脾补肺方组(8.37 g·kg-1· d-1),氨茶碱组(40 mg· kg1·d-1)和地塞米松组(0.1 mg·kg-1·d-1),每组15只.用0.2％ OVA的氢氧化铝凝胶10点致敏,并以1％ OVA生理盐水溶液雾化攻击复制幼龄大鼠哮喘模型,并给予相应的药物处理.小动物肺功能仪观察大鼠气
目的:研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2(Bci-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达的影响.方法:选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L-1,另设置仅添加10％胎牛血清作为空白组.采用噻唑蓝(MTT)比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免
目的:探讨冠心病心力衰竭气虚血瘀证严重程度与心功能指标、能量代谢指标、凝血功能指标、炎性因子指标之间的相关性,为冠心病心力衰竭气虚血瘀证的生物学基础研究提供科学依据.方法:连续收集200例冠心病心力衰竭气虚血瘀证患者作为研究组,根据气虚血瘀证评分划为轻、中、重3组,并纳入40例同期健康体检者作为对照组,完成各组心功能指标、能量代谢指标、凝血相关指标及炎性因子等生物学指标的采集.比较各组指标,采用Spearman分析差异指标与气虚血瘀证严重程度的相关性,同时使用有序Logistic回归分析气虚血瘀证严重程度
目的:观察黄芪桂枝五物汤合生脉饮治疗糖尿病心肌病心脏功能的疗效及抗心肌纤维化和抗炎作用.方法:将96例患者按随机数字表法分为观察组和对照组各48例.两组均给予控制血糖、血脂、血压及抗心衰等综合措施.对照组口服通脉降糖胶囊,3粒/次,3次/d;观察组口服黄芪桂枝五物汤合生脉饮加减,1剂/d.两组疗程均为3个月.进行治疗前后超声心电图检查记录左室射血分数(LVEF),舒张早期峰值速度E峰/舒张晚期峰值速度A峰,计算(E/A),左心室舒张末期内径(LVEDd)和每搏输出量(SV),检测治疗前后心肌肌钙蛋白-I(
目的:探讨调脉合剂联合酒石酸美托洛尔治疗气阴两虚兼血脉瘀热型冠心病室性期前收缩的临床效果.方法:纳入冠心病合并室性期前收缩患者共95例,采用随机数字表法分为治疗组和对照组,脱落4例,完成随访91例,治疗组45例和对照组46例,对照组在冠心病常规治疗基础上应用酒石酸美托洛尔治疗,治疗组在对照组基础上联合调脉合剂治疗,观察两组治疗前后中医证候疗效和心电图,24 h动态心电图等疗效性指标及安全性指标,疗程4周.结果:治疗后,治疗组心律失常疗效优于对照组(P＜0.05);治疗后,治疗组室性期前收缩次数减少情况优于
目的:观察引火汤(YHT)对慢性应激诱导的双侧卵巢摘除(OVX)小鼠抑郁样行为的影响并探索其基于雌二醇(E2)/雌激素受体β(ERβ)信号通路的作用机制.方法:实验分两部分完成,第一部分将小鼠随机分为假手术组(Sham),模型组(OVX),阳性药组(E2,0.13 mg·kg-1)和引火汤组(YHT,23.4 g·kg-1).采用OVX联合慢性不可预知性温和刺激(CUMS)方法复制OVX.双侧卵巢摘除术后第8天,各组小鼠开始CUMS并开始给药,强迫游泳(FST),悬尾(TST),旷场(OFT)3种行为学实
目的:研究滋肾丸(ZSW)对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据.方法:自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组(1.0 mg·kg-1)及ZSW高、中、低剂量(6.0,3.0,1.5 g·kg-1)组,非糖尿病db/m小鼠为正常组.模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周.每2周检测尾静脉空腹血糖(FBG);每4周检测尿白蛋白/肌酐(ACR),N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和胱抑素