【摘 要】
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采用PCR技术扩增mRuby2,将其插入原核表达载体p ET30a（＋）中,用p ET30a（＋）-mRuby2转化BL21（DE3）并诱导重组蛋白表达,用荧光显微镜及SDS-PAGE观察、检测目标蛋白的表达情况,以Ni亲和层
【基金项目】
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重庆理工大学实验创新基金资助项目
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采用PCR技术扩增mRuby2,将其插入原核表达载体p ET30a（＋）中,用p ET30a（＋）-mRuby2转化BL21（DE3）并诱导重组蛋白表达,用荧光显微镜及SDS-PAGE观察、检测目标蛋白的表达情况,以Ni亲和层析技术纯化重组蛋白。结果表明：构建的重组表达菌株经IPTG诱导后,发酵液颜色随诱导时间延长逐渐转为橙红,离心后的沉淀菌体为深粉红色,在荧光显微镜下,菌体发出明亮的红色荧光。SDS-PAGE检测发现,IPTG诱导5 h,重组蛋白表达量达到峰值。采用Ni螯合亲和层析技术从发酵菌体中分离出
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