【摘 要】
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目的 研究全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(AcEGCG)对H2O2诱导的人表皮黑素细胞损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法 体外培养人表皮黑素细胞,采用H2O2诱导细胞损伤
【机 构】
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浙江中医药大学附属广兴医院皮肤科,杭州,310053杭州市第三人民医院皮肤科;
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目的 研究全乙酰化表没食子儿茶素没食子酸酯(AcEGCG)对H2O2诱导的人表皮黑素细胞损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法 体外培养人表皮黑素细胞,采用H2O2诱导细胞损伤模型.实验分对照组、H2O2组、不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)组和AcEGCG组.MTS法测定细胞存活率,LDH测试盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)的表达水平;Western印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达情况.多个样本均数比较采用单因素方差分析,各样本间多重比较采用SNK-q检验.结果 与对照组相比,H2O2处理组黑素细胞存活率明显降低(22.99％±0.53％,P＜ 0.01),细胞内LDH漏出量增加(36.58％±0.73％,P＜ 0.01),细胞内ROS水平明显升高(19.08±0.57,P＜ 0.01),caspase-9和caspase-3表达升高(分别为2.65±0.079和2.36±0.057,均P＜0.01).与H2O2组相比,细胞存活率在10、20、40 μmol/L AcEGCG组(79.50％±3.62％、86.52％±5.13％、97.81％±5.21％)及EGCG组(43.19％±1.68％、63.34％±3.60％、70.82％±2.1％)明显增加(均P＜0.01),caspase-9分别降低为1.44±0.067、1.26±0.059、1.10±0.072及2.31±0.085、2.13±0.091、1.35±0.064,caspase-3分别降低为1.70±0.053、1.57±0.057、1.24±0.068及2.09±0.076、1.98±0.093、1.79±0.056,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);LDH含量均明显下降(P＜ 0.01);40 μmol/L AcEGCG或EGCG处理后,ROS含量明显下降(均P＜ 0.01).结论 AcEGCG对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用,且显著优于EGCG,可能通过清除自由基、抗氧化、降低caspase-9及caspase-3表达等途径发挥作用.
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