【摘 要】
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目的 建立荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法,评估其在肺结核的临床诊断和疗效评估中的应用价值.方法针对结核分枝杆菌保守序列IS6110基因设计引物和探针,建立荧光定量PCR方法
【机 构】
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深圳市龙岗区疾病预防控制中心,广东深圳,518172
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目的 建立荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法,评估其在肺结核的临床诊断和疗效评估中的应用价值.方法针对结核分枝杆菌保守序列IS6110基因设计引物和探针,建立荧光定量PCR方法.分别以荧光定量PCR、集菌培养法和抗酸染色法检测168份疑似肺结核和5例确诊病人随访的痰标本,比较各方法在结核病诊断以及治疗效果评估中的作用.结果该荧光定量PCR法能扩增IS6110基因片段(107 bp),序列分析显示为结核分枝杆菌核酸序列,方法的检测灵敏度为4 copies/反应；而对偶发分枝杆菌、蟾分枝杆菌、草分枝杆菌、龟分枝杆菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌的样本扩增结果均为阴性,荧光定量PCR法与集菌培养法和抗酸染色法对临床样本的检出率分别为64.29％( 108/168)、35.12％ (59/168)和12.50％(21/168),前者高于后两者(P＜0.01).对抗酸染色法和集菌培养法阳性的样本,荧光定量PCR法的灵敏度分别为100.00％(21/21)和96.61％(57/59).对20份非结核病人来源的痰标本,荧光定量PCR方法检测结果均为阴性,符合率为100.00％.用荧光定量PCR检测方法对5例活动性肺结核病例治疗期间进行了动态检测,结果显示病人晨痰中结核分枝杆菌的数量呈持续下降的趋势(即Ct值增加).结论该荧光定量PCR方法具有快速、敏感和特异性高的特点,可以快速、及时获取病人服药后的治疗效果,为医生的后续督导治疗提供依据,具有重要的临床意义.
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