【摘 要】
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目的:酵母双杂交技术筛选结肠癌细胞中与裸角质层同源蛋白1(naked cuticle homolog 1,NKD1)相互结合的蛋白质,从而进一步了解NKD1.方法:以结肠癌细胞SW480的cDNA为模板,克隆NKD1基因,并将其成功构建在pGBKT7诱饵载体上.利用酵母双杂交技术从结肠癌SW480细胞文库进行筛选.结果:初步筛选获得13个阳性克隆菌株.经测序,在数据库中BLAST比对后,共确定为8种不同基因编码的蛋白片段.回转实验进一步验证了这8种不同基因编码的蛋白均能够激活酵母双杂交系统中的His3、A
【机 构】
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江苏大学附属武进医院/徐州医科大学临床学院,江苏 常州 213017;内蒙古农业大学生命科学学院,内蒙古 呼和浩特 010018
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目的:酵母双杂交技术筛选结肠癌细胞中与裸角质层同源蛋白1(naked cuticle homolog 1,NKD1)相互结合的蛋白质,从而进一步了解NKD1.方法:以结肠癌细胞SW480的cDNA为模板,克隆NKD1基因,并将其成功构建在pGBKT7诱饵载体上.利用酵母双杂交技术从结肠癌SW480细胞文库进行筛选.结果:初步筛选获得13个阳性克隆菌株.经测序,在数据库中BLAST比对后,共确定为8种不同基因编码的蛋白片段.回转实验进一步验证了这8种不同基因编码的蛋白均能够激活酵母双杂交系统中的His3、Ade2和LacZ报告基因.这8种不同基因中的4种基因编码的蛋白片段为YWHA蛋白家族成员,其中2种都是编码YWHAE蛋白片段.在结肠癌HCT116细胞中通过免疫共沉淀实验进一步验证,NKD1与YWHAE在结肠癌细胞中可以相互结合.结论:结肠癌细胞中,证实YWHAE是NKD1结合蛋白质,通过调控胰岛素的敏感性,进而调控结肠癌细胞对葡萄糖的摄入.
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