目的:建立一种新型比率荧光探针法用于定量检测血浆中外泌体。方法:将Cy5荧光探针标记的CD63核酸适配体固定到链霉亲和素磁珠（MNPs）上，得到MNPs-Apt,加入SYBR GreenⅠ（SGⅠ）核酸染料构建比率荧光免疫磁珠（MNPs-Apt-SGⅠ）。当外泌体存在时，CD63核酸适配体捕获外泌体而发生结构改变，SGⅠ探针从双链中释放，免疫磁珠上的SGⅠ荧光强度大幅减弱，而Cy5荧光探针的荧光恒定，根据两种荧光探针被激发的荧光信号比值变化[Δ（FC/FS）]对外泌体进行定量检测。结果:外泌体浓度在8.0×10~4～1.0×10~7个/μL范围内，Δ（FC/FS）与外泌体浓度呈良好的线性关系。该方法灵敏度高，选择性好，检出限为4.0×10~4个/μL。此外，所建立的方法成功地应用于血浆外泌体的检测。结论:构建的比率荧光探针法具有快速、灵敏、准确度高、特异性强等优点，可用于血浆样品外泌体的定量检测。