【摘 要】
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目的 探索线粒体转录因子A(TFAM)表达下调促进膀胱癌细胞逃避NK细胞杀伤的作用及机制.方法 免疫组化检测膀胱癌及癌旁组织中TFAM的表达,统计学分析其表达差异及膀胱癌组织中TFAM表达水平与膀胱癌患者预后的相关性.利用慢病毒载体构建TFAM稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞株并与NK细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测TFAM表达对NK细胞活化及杀伤的影响.qPCR、Western-blot及流式细胞术检测膀胱癌细胞中TFAM表达对人类的细胞抗原-G(HLA-G)表达的影响.同时,利用HLA-G中和抗
【机 构】
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空军军医大学第二附属医院唐都医院泌尿外科,西安 710038;空军军医大学基础医学院,西安 710069
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目的 探索线粒体转录因子A(TFAM)表达下调促进膀胱癌细胞逃避NK细胞杀伤的作用及机制.方法 免疫组化检测膀胱癌及癌旁组织中TFAM的表达,统计学分析其表达差异及膀胱癌组织中TFAM表达水平与膀胱癌患者预后的相关性.利用慢病毒载体构建TFAM稳定干涉及过表达的膀胱癌细胞株并与NK细胞共培养,ELISA及LDH释放实验检测TFAM表达对NK细胞活化及杀伤的影响.qPCR、Western-blot及流式细胞术检测膀胱癌细胞中TFAM表达对人类的细胞抗原-G(HLA-G)表达的影响.同时,利用HLA-G中和抗体阻断TFAM干涉细胞与NK共培养体系中HLA-G功能,或者利用重组rHLA-G增强TFAM过表达膀胱癌细胞与NK细胞共培养体系中HLA-G功能后,检测膀胱癌细胞TFAM表达是否是通过HLA-G影响NK细胞的活化及杀伤.qPCR、Picogreen与Mitotracker共染膀胱癌细胞检测TFAM表达对线粒体DNA(mtDNA)应激发生的影响.利用DNA酶Ⅰ去除TFAM稳定干涉膀胱癌胞质mtDNA或者鱼藤酮阻断TFAM过表达膀胱癌细胞线粒体功能后,检测TFAM是否是通过mtDNA应激影响HLA-G的表达.结果 与癌旁组织相比,TFAM在膀胱癌组织中的表达显著减少,且TFAM表达越低的膀胱癌患者其预后越差.在膀胱细胞中干涉TFAM表达可通过上调HLA-G表达来抑制NK细胞的活化及杀伤.反之,在膀胱癌细胞中过表达TFAM可通过抑制HLA-G的表达来促进NK细胞的活化及杀伤.在TFAM干涉的膀胱癌细胞中加入DNA酶Ⅰ可显著抑制TFAM干涉诱导的HLA-G表达,在TFAM过表达的膀胱癌细胞中加入鱼藤酮可恢复TFAM过表达导致HLA-G表达下调.结论 TFAM表达下调诱导mtDNA应激促进HLA-G表达来抑制NK细胞的活化及杀伤.
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