【摘 要】
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为探究金钗石斛法尼基焦磷酸合酶基因（DnFPPS）是否参与倍半萜类生物碱、萜类合成等代谢过程，根据金钗石斛转录组信息， 克隆金钗石斛DnFPPS基因全长cDNA序列，采用荧光定量PCR技术检测其在石斛不同生长年限茎和叶中的相对表达水平，构建pGEX-6t-1-DnFPPS原核表达载体并在大肠杆菌中表达。获得金钗石斛DnFPPS基因cDNA全长序列共1 044 bp核苷酸，NCBI Blastx结果
【基金项目】
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贵州大学引进人才项目（2019#17）； 贵州大学本科生创新创业训练SRT项目（贵大SRT字（2019）320号）； 贵州省自然科学基金项目（黔科合基础（2017）1403）； 贵州省科技计划项目（黔科合支撑（2019）2962号）； 贵州省药用植
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为探究金钗石斛法尼基焦磷酸合酶基因（DnFPPS）是否参与倍半萜类生物碱、萜类合成等代谢过程，根据金钗石斛转录组信息， 克隆金钗石斛DnFPPS基因全长cDNA序列，采用荧光定量PCR技术检测其在石斛不同生长年限茎和叶中的相对表达水平，构建pGEX-6t-1-DnFPPS原核表达载体并在大肠杆菌中表达。获得金钗石斛DnFPPS基因cDNA全长序列共1 044 bp核苷酸，NCBI Blastx结果显示，DnFPPS基因编码的蛋白与霍山石斛来源FPPS1具有最高相似性，氨基酸一致度达98%。DnFPPS 具有异戊烯基转移酶基因的5个典型保守功能域。进化树分析结果显示，DnFPPS 基因与霍山石斛的FPPS1具有较近的遗传距离。其推导出的蛋白质序列经预测其结构与穗状蒿Artemisia spiciformis 中FPP/GFPP合成酶的嵌合体蛋白晶体结构相似性可达到73.16%。表达水平分析发现DnFPPS基因表达与石斛碱累积呈正相关。在大肠杆菌中表达后SDS-PAGE电泳观察得到72 kDa左右目的条带，与预测的蛋白分子量相符合。该研究为DnFPPS基因功能研究奠定重要基础，为阐明金钗石斛倍半萜及倍半萜类生物碱物质生物合成途径研究提供重要理论参考。
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