【摘 要】
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为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW 124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清Ⅱ型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtracti
【机 构】
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广东省农科院兽K研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室
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为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW 124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清Ⅱ型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW 124和H465菌株细菌基因组的表达差异,并进行两轮差减杂交和两次PCR扩增,将第2次PCR产物与pMD19-T载体相连,转化大肠杆菌Ecoli DH5α感受态细胞并进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库.结果共获得327个阳性克隆,筛选100个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2 000 bp大小的片段.差异DNA差减文库的构建为进一步筛选、克隆HPS特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础.
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