超氧化物歧化酶(Val16Ala)基因的克隆及其真核表达载体的构建

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目的获得锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因并进行Vall6Ala(GTT+GcT)位点的定点突变,构建MnSOD(Val)及MnSOD(Ala)基因的真核表达载体。方法采用RT-PCR法从人乳腺癌细胞MCF-7中扩增MnSOD(Val)基因;PCR引物延伸法对Vall6Ala进行定点突变以获得MnSOD(AIa)基因;通过胁RI+XhoI双酶切PCR产物与相应质粒pEGFP-NI连接构建两基因的真核表达载体pEGFP-N1一MnSOD(Val)和pEGFP-N1-MnSOD(AIa)。结果突变位点经测序证
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