目的:利用反向线性点杂交（Reverse Line Blot assay,RLB）技术建立检测embB基因突变筛查结核分枝杆菌耐多药株（指至少对异烟肼和利福平两种以上药物产生耐药的结核分枝杆菌,multi-drug resistant tuberculosis,MDR-TB）的方法。方法:采用比例法药敏试验检测301株结核分枝杆菌临床分离株的耐药表型,分别用测序及反向线性点杂交方法检测embB基因突变位点,并用比例法药敏试验作为表型检测对照方法,测序作为基因型检测对照方法,对RLB方法筛查耐多药株进行评价。结果:经表型药敏检测耐多药株占57.9%,非耐多药株占25.2%,全敏感株占16.9%。经测序检测94株发生embB Met306突变,其中89.4%（84/94）的突变发生在耐多药株1,0.6%为非耐多药株。Met306突变率在乙胺丁醇（Ethambutol,EMB）耐药组46.9%与乙胺丁醇敏感组47.8%间差异无统计学意义（χ2=0.01,P>0.05）,而突变率在耐多药组为48.3%与非耐多药组13.2%间差异有统计学意义（χ2=48.53,P<0.01）。用反向线性点杂交检测embB基因突变位点与测序法相比敏感度为96.8%,特异度为99.0%,二者一致率达98.3%。用反向线性点杂交检测耐多药株与表型检测方法相比敏感度为48.3%,特异度为88.2%,二者一致率为60.4%。结论:反向线性点杂交方法检测em-bB基因突变可在常规检测中替代测序法快速筛查结核分枝杆菌耐多药株。