【摘 要】
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目的 原核表达结核分枝杆菌（MTB）Rv2107基因编码蛋白PE22，并对PE22蛋白进行生物信息学分析。方法 以卡介苗（BCG）基因组为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增Rv2107基因，克隆至表达载体pET-32a获得重组质粒PE22-pET-32a，对含重组质粒PE22-pET-32a的BL-21菌诱导表达后，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物，亲和层析法纯化P
【机 构】
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大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室
【基金项目】
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大理大学高层次人才资助项目（KYBS201708）;大理大学临床分子免疫学创新团队资助项目（ZKLX2019105）；
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目的 原核表达结核分枝杆菌（MTB）Rv2107基因编码蛋白PE22，并对PE22蛋白进行生物信息学分析。方法 以卡介苗（BCG）基因组为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增Rv2107基因，克隆至表达载体pET-32a获得重组质粒PE22-pET-32a，对含重组质粒PE22-pET-32a的BL-21菌诱导表达后，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物，亲和层析法纯化PE22蛋白并蛋白质印迹法（Western bolt）鉴定。采用Expasy ProtParam、TMHMM Server v.2.0、SignalP 5.0Server、NetPhos-3.1、Cell-PLoc2.0、SOPMA、SWISS MODEL、ABCpred、SYFPEITHI等软件分析PE22蛋白的相关生物信息学。结果 成功构建重组质粒PE22-pET-32a，并获得以包涵体形式表达的PE22蛋白。生物信息学分析显示PE22蛋白相对分子质量为10 373.77，理论等电点为6.82，由98个氨基酸组成，为疏水性蛋白，无跨膜区与信号肽，定位于细胞壁，二级结构主要由α-螺旋构成。抗原表位预测分析显示PE22蛋白含有10个B细胞抗原表位、13个T细胞抗原表位与12个限制性CTL细胞表位。结论 PE22蛋白的原核表达主要以包涵体形式表达，具有多个潜在的T、B细胞抗原表位，可作为研发新型免疫诊断试剂的候选分子靶标或TB疫苗的候选蛋白。
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