【摘 要】
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目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培（HPAEC-PAD）法检测冻干b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗中游离多糖含量的方法，并对其进行验证，为Hib结合疫苗的质量监控提供依据。方法 优化水解供试品的实验条件，利用HPAEC-PAD法检测供试品中多聚磷酸核糖基核糖醇（PRP）含量。色谱条件采用CarboPacPA10分析柱（2mm×250mm）与CarboPac PA10保护柱（2 mm×50 m
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目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培（HPAEC-PAD）法检测冻干b型流感嗜血杆菌（Hib）结合疫苗中游离多糖含量的方法，并对其进行验证，为Hib结合疫苗的质量监控提供依据。方法 优化水解供试品的实验条件，利用HPAEC-PAD法检测供试品中多聚磷酸核糖基核糖醇（PRP）含量。色谱条件采用CarboPacPA10分析柱（2mm×250mm）与CarboPac PA10保护柱（2 mm×50 mm），氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱，流速为0.25ml/min，脉冲安培检测器，进样体积为20μl。用乙醇分步沉淀法、C4固相萃取法和超速离心法分离Hib游离多糖，并对三种方法得到的结果进行比较。同时验证方法的系统适用性、特异性、线性、精密度及准确性。结果 确定水解条件为终浓度0.4mol/L的NaOH，于37℃振荡1.5 h。本公司生产的冻干Hib结合疫苗不可用C4固相萃取柱分离游离多糖，确定了超速离心联合HPAEC-PAD法为冻干Hib结合疫苗游离多糖检测的最适方法。该方法专属性、分离度良好；PRP浓度在0.1962～19.616μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系，R2＞0.99。3批供试品分别测定6次，RSD分别为4.1%、2.3%、3.3%，不同时间测得的中间精密度RSD分别为8.3%、3.6%和9.1%。游离多糖的加标回收率分别为102.9%、94.3%、92.0%,RSD分别为3.9%、8.7%、5.3%。结论 初步建立了冻干Hib结合疫苗游离多糖含量测定的超速离心联合HPAEC-PAD法。该方法具有良好的准确性、精密度及稳定性，可用于冻干Hib结合疫苗中游离多糖含量的检测。
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