【摘 要】
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目的 获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的白细胞介素(IL)-24突变体(RGD-IL-24)蛋白,研究其生物活性.方法用重叠聚合酶链反应(PCR)技术在IL-24 cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC,构建RGD-IL-24 cDNA,将其克隆人质粒pET28a(+)获得pET28a/RGD-IL-24.pET28a/RGD-IL-24转化菌株BL21(DE3),采用亲合层析纯化蛋白,透
【机 构】
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221002,江苏,徐州医学院附属医院普外科,221002,江苏,徐州医学院附属医院普外科,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,徐州医学院肿瘤生物治疗重点实验室,徐州医
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目的 获得含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽的白细胞介素(IL)-24突变体(RGD-IL-24)蛋白,研究其生物活性.方法用重叠聚合酶链反应(PCR)技术在IL-24 cDNA序列中引入甘氨酸密码子GGC,构建RGD-IL-24 cDNA,将其克隆人质粒pET28a(+)获得pET28a/RGD-IL-24.pET28a/RGD-IL-24转化菌株BL21(DE3),采用亲合层析纯化蛋白,透析复性.SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定RGD-IL-24蛋白.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RGD-IL-24刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和干扰素(IFN)-γ的能力来测定RGD-IL-24免疫活性.细胞黏附实验检测RGD-IL-24与多种肿瘤细胞结合特性.结果成功获得RGD-IL-24基因,并构建表达质粒pET28a/RGD-IL-24.表达的RGD-IL-24蛋白约占菌体总蛋白的30%,纯化后蛋白纯度超过90%.RGD-IL-24处理的人PBMC培养上清IL-6、TNF-α和IFN-γ浓度(ng/L)分别为(780.5 ±98.3、2399.1 ±113.2、2130.1 ±98.6),显著高于IL-24处理组(551.0±52.1、1982.5 ±138.2、1762.9 ±119.8).黏附实验证实RGD-IL-24能增强与肿瘤A549、HeLa和ACHN细胞靶向结合作用.结论含RGD肽的RGD-IL-24蛋白免疫生物活性及与肿瘤细胞靶向结合能力较IL-24明显增强。
其他文献
目的 观察骨形成发生蛋白4（BMP4）和Smad4在阿霉素诱导U251细胞抑制中的表达变化。方法应用噻唑蓝（MTT）检测空白组和阿霉素组U251细胞增长活性，应用公式（1-阿霉素组A／空白组A）×100％计算阿霉素组U251细胞增长抑制率。应用荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western blot检测空白组和阿霉素组BMP4和Smad4的表达。结果阿霉素在24、36、48、60、72h对细胞抑制
在中国,胰腺癌发病率逐渐增加,目前其肿瘤相关致死率已跃居第6位[1].早期发现是胰腺癌得以及时治疗的前提之一.目前缺乏理想的胰腺癌血清学标志物.蛋白质组学为肿瘤研究提供了新的思维和技术平台[2].在本研究中,我们初步探讨了二维电泳及质谱法筛选胰腺癌血清标志物中的应用,并希望发现一些与胰腺癌相关的标志物,为胰腺癌的早期诊断提供线索。
大鼠30%减体积肝移植模型是临床亲体肝移植、劈离式肝移植等实验研究的重要工具[1].供肝修整时切除左外叶、中间叶达到减体积目的是目前普遍采用的方法"[1,2],我们以体内外联合切除法建立大鼠30%减体积移植模型,探讨其优越性。
目的 观察131Ⅰ-17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠模型肿瘤生长的抑制作用.方法采用过氧化氢标记法制备131Ⅰ-17-AAG;将30只荷瘤裸鼠随机分成3组:131Ⅰ-17-AAG治疗组,二甲基亚砜(DMSO)对照组和单纯Na131Ⅰ治疗组.尾静脉注射相应试剂后,观察28 d,比较肿瘤的体积,计算抑瘤率;Western blot检测肿瘤组织Akt2蛋
本研究旨在利用神经干细胞(NSCs)作为基因的传递载体,观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统在体外对胶质瘤细胞增殖的抑制作用。
目的 建立体外获得唾液酸化路易斯抗原X(SLeX)ssDNA适配子(aptamers)的方法.方法 构建长度为70 nt的初始随机单链DNA库,其中含30个随机序列,以溴化氰活化的琼脂糖小球为筛选介质,运用指数富集配体的系统进化技术(SELEX技术)获得SLeX的ssDNA适配子.将适配子库克隆、测序,采用DNAMAN软件对其结构进行分析,通过生物素-亲和素-辣根过氧化物酶显色系统测定适配子与SL
目的 探讨伊立替康与亚甲蓝耦合液在大鼠胃癌淋巴结中的靶向示踪作用及其机制.方法 应用Walker-256细胞株建立大鼠胃癌模型,免疫组织化学检测癌组织中伊立替康底物拓扑异构酶Ⅰ(topo Ⅰ)的表达.分别用5、10、20、40 mg伊力替康粉剂耦合2 ml亚甲蓝注射液,另用中华墨汁、纳米活性炭和亚甲蓝作为对照.70只胃癌大鼠分为7组,瘤周4点浆膜下微针分别注射上述7种染色剂.观察各组淋巴结染色、褪
目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓中的表达及意义.方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测20例人肝细胞肝癌的原发灶及其门脉癌栓和20例未发生转移的原发性肝癌组织中TRAIL受体mRNA的表达水平.结果 死亡受体DR4、DB5在无转移的肝癌组织分别为(3.59±0.87)、(1.98
目的 观察丙酸睾酮对甘油萃取神经修复大鼠坐骨神经缺损的促进作用.方法 取SD大鼠60只,手术造成左侧坐骨神经1 cm缺损.每组20只.A组:甘油萃取的坐骨神经修复左侧缺损并注射丙酸睾酮(TP)50 g/L,0.1 ml,2次/周;B组仅以甘油萃取的坐骨神经修复缺损;C组以同种异体神经修复.术后16周,比较各组运动神经传导速度恢复率(RRMNCV)和腓肠肌复合动作电位波幅恢复率(RRCMAP);再生
目的 观察整合素连接激酶(ILK)在大鼠创面中的表达,探讨其在创面愈合中的作用及机制.方法 健康SD大鼠20只,随机选取16只建立浅Ⅱ度烫伤模型,4只作为正常对照,烫伤后第1、5、10、15天分别随机选取4只大鼠,运用免疫组织化学检测创面中ILK的表达.7例人正常皮肤成纤维细胞,转化生长因子(TGF)-β1组给予TGF-β1刺激72 h,同一细胞培养相同时间作为对照,荧光定量聚合酶链反应(PCR)